胃癌以高發(fā)病率、高病死率、高隱匿性為主要特征， 是常見的惡性腫瘤，發(fā)病率僅次于肺癌，患者確診時大 多為中晚期，已經(jīng)失去了最佳手術(shù)的機會; 化療藥物由于 嚴重的毒副作用，很多患者不能耐受，并且免疫抑制、腫 瘤耐藥等因素也是限制療效的主要原因，故越來越多的 研究者將目光轉(zhuǎn)移到傳統(tǒng)醫(yī)學領(lǐng)域，以期找到低毒副作用、 高療效的藥物。六味安消散由堿花、大黃、山柰、訶子、 藏木香、寒水石 6 味藥材組成，具有解痙、化積消食之功 效，臨床上主要用于胃痙攣、胎衣滯留、大便秘結(jié)、胃腹 脹滿、食積不化等癥狀的治療，方中大黃、山柰、藏木 香、寒水石具有抗腫瘤作用，而堿花、訶子具有調(diào)節(jié)免疫 功能，但其抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用尚無報道。

1 材料

1. 1 動物與細胞株

BalB/C 小鼠，清潔級，體質(zhì)量 ( 20± 2) g，購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證 號 SYXK ( 京) 2017-0033。小鼠胃癌 MFC 細胞株由上海拜 格生物公司提供。

1. 2 試藥

六味安消散購于內(nèi)蒙古民族大學附屬醫(yī)院蒙藥 制劑室，內(nèi)藥制字 M13060034。噻唑藍 ( MTT) 檢測試劑 盒購于美國 Sigma 公司; 堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶免疫復 合物 ( APAAP) 購于上海鈺博生物科技有限公司; CD4、CD25 單克隆抗體購于美國 BD 公 司; 腫 瘤 壞 死 因 子-α ( TNF-α) 、白細胞介素-2 ( IL-2) 檢測試劑盒購于上海紀寧 生物科技有限公司。

1. 3 儀器

分析天平 ( 型號 BSM-120，上海卓精電子科技有限公司) ; 細胞培養(yǎng)箱 ( 型號 HPX-9052MBE，上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司) ; 紫外可見分光光度計 ( 型 號 UV-2102PCS，美國尤尼柯公司) ，全自動酶標儀 ( 型號 ELx800，美國寶特公司) 。

2 方法

取對數(shù)生長期 MFC 細胞，調(diào)整密度為 2×106 /mL，在小鼠右側(cè)腋下接種 0. 2 mL，1 周后可見米粒 大小腫瘤，提示建模成功。取建模成功的小鼠 60 只，隨機 分為模型組、5-氟尿嘧啶組 ( 0. 02 g /kg) 及六味安消散 高、中、低劑量組 ( 8、4、2 g /kg) ，每組 12 只，灌胃給 藥，1 次/d。給藥期間，每天稱定小鼠體質(zhì)量，并觀察小 鼠毛發(fā)、食欲、精神等一般狀態(tài)給藥 14 d 后， 頸椎脫臼處死小鼠，小心剖取腫瘤、脾臟、胸腺，磷酸鹽 緩沖液沖洗殘留血跡，濾紙吸干，精密稱定質(zhì)量，計算抑 瘤率及脾臟、胸腺指數(shù)。抑瘤率= ［( 模型組瘤重－給藥組 瘤重) /模型組瘤重］ ×100%，脾臟指數(shù) =脾臟重/體質(zhì)量， 胸腺指數(shù)=胸腺重/體質(zhì)量。取各組小鼠脾 臟，去除脂肪和結(jié)締組織，剪碎，置于含 10%小牛血清的 ＲPMI-1640 培養(yǎng)液中，過 200 目細胞篩。低溫條件下加紅 細胞裂解液離心，Hank’s漂洗 3 次后，重懸于含 10%小牛 血清的 ＲPMI-1640 培養(yǎng)液中，APAAP 法測定細胞比例。給藥 14 d 后，小鼠摘眼球取血， 酶聯(lián)免疫吸附 ( ELISA) 法檢測外周血 TNF-α、IL-2 水平。 2. 5 統(tǒng)計學分析 通過 SPSS17. 0 軟件進行處理，數(shù)據(jù)以 ( x±s) 表示，2 組間比較采用 LDS-t 檢驗，多組間比較采用 單因素方差分析。以 P＜0. 05 表示差異具有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

表 1 顯示，給藥前 各組小鼠體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學意義 ( P＞ 0. 05) ; 給藥后， 與模型組比較，5-氟尿嘧啶組小鼠體質(zhì)量顯著下降，而六 味安消散組顯著增加 ( P＜0. 05，P＜0. 01) 。此外，模型組、 5-氟尿嘧啶組小鼠毛發(fā)暗淡，食欲不佳，精神萎靡; 六味 安消散組小鼠毛發(fā)光澤，食欲佳，精神良好。


4 討論

本實驗采用移植性腫瘤模型，它可保持機體完整性， 不影響外界環(huán)境和機體的正常聯(lián)系，是評價藥物抑瘤作用 及調(diào)節(jié)免疫功能的經(jīng)典模型。給予 MFC 胃癌荷瘤小鼠六味安消散后發(fā)現(xiàn)，小鼠一般狀態(tài)好于模型組，體質(zhì)量明顯 增加，瘤重下降，提示該藥物具有較好的抗腫瘤作用。惡 性腫瘤患者往往會出現(xiàn)免疫抑制情況，免疫抑制與預后、 臨床分期等關(guān)系密切，故提高機體免疫功能有利于增加抗 腫瘤效果。脾臟和胸腺對機體的免疫能力有標示作用，是 機體細胞、體液免疫的主要器官，其臟器指數(shù)能在一定水 平上評價機體免疫功能的高低，本實驗發(fā)現(xiàn)六味安消散 組小鼠脾臟、胸腺指數(shù)明顯增加，初步判斷六味安消散具 有提高免疫功能的作用。



 

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