小鼠抗疲勞性能分析-恒溫水槽的使用?。。?/h1>

來源：未知 發(fā)布日期：2019-09-27 11:04【大 中 小】

隨著社會高速的發(fā)展，生活節(jié)奏的加快、工作壓 力的增大，人們的機體與心理往往處于高度緊張的 狀態(tài)，因此疲勞越來越成為影響人們生活質(zhì)量的重 要因素。疲勞作為一種在腦力或體力活動到達 一定階段時出現(xiàn)的正常的生理現(xiàn)象，是指機體生理 過程不能持續(xù)其機能在特定水平或整體不能維持預(yù)定的運動強度而出現(xiàn)的一種狀態(tài)，可以引起機體 運動能力降低、差錯事故增多、工作效率降低、戰(zhàn)斗 力減退、反應(yīng)遲鈍、動作協(xié)調(diào)性降低。

1 材料與方法

1. 1 實驗材料

成年雄性昆明種小鼠 96 只，平均體重( 24 ± 2) g( 泰邦生物科技公司提供) ?；钚悦庖咔虻鞍椎包S 粉( 注: 低溫制備的免疫球蛋白蛋黃粉) 和缺乏活性 免疫球蛋白的蛋黃粉( 普通蛋黃粉) ( 注: 常規(guī) 180° C 以上高溫瞬間噴霧干燥方法制備的蛋黃粉) 均由 濰坊康奧思生物技術(shù)有限公司提供。血 尿 素 氮 ( BUN) 測試盒、全血乳酸( LD) 測試盒、糖元測試盒、 丙二醛( MDA) 測試盒均購自南京建成生物工程研 究所。UV754 分光光度計( 上海第三分析儀器廠) ， DK-8D型電熱恒溫水槽（上海博迅提供），有機玻璃材質(zhì)的 50 cm × 50 cm × 50 cm 游泳箱。

1. 2 方法

1. 2. 1 活性免疫球蛋白的效價測定

分別對活性 免疫球蛋白蛋黃粉、普通蛋黃粉和生理鹽水進行抗 雞新城疫病毒( NDV) 和禽流感病毒( AIV) 血清型 H9 抗原血凝抑制抗體( HI) 效價的測定。取活性 免疫球蛋白蛋黃粉和普通蛋黃粉各 1 g，充分溶解到 10 mL 生理鹽水中，然后分別取 50 μL 在 96 孔 V 型 版上做遞倍稀釋，每孔再加入同體積的 4 單位抗原， 混勻，置 37℃中和 1 h。抽取公雞血液，2 000 r/min 離心 5 min，去上清及表層白細胞，生理鹽水沖洗紅 細胞，繼續(xù)以上述條件離心，如此反復(fù)洗滌紅細胞 3 ～ 5 次收集紅細胞，以生理鹽水制成 1% 的紅細胞懸 液。抗原與樣品中和后加入 1% 的紅細胞懸液，置 37℃ 40 min 后觀察結(jié)果。

1. 2. 2 小鼠分組及飼喂方法

將 96 只小鼠適應(yīng)性 喂養(yǎng) 1 w 后，按體重隨機分為 4 組，設(shè)低濃度組( 活 性免疫球蛋白蛋黃粉) 、高濃度組( 活性免疫球蛋白 蛋黃粉) ，蛋黃粉對照組( 普通蛋黃粉) 和空白對照 組 ( 蒸餾水) ，每組 24 只，每次實驗從對應(yīng)分組中隨機抽取 8 只。組間體重差異無統(tǒng)計學意義。適應(yīng)性 飼養(yǎng)觀察 5 d 后灌胃相應(yīng)受試物，低、高濃度組分別 以 50 mg /( kg·d) 、100 mg /( kg·d) 的活性免疫球 蛋白蛋黃粉溶液灌胃，蛋黃粉對照組以 100 mg /( kg ·d) 的缺乏活性免疫球蛋白的蛋黃粉溶液灌胃，空 白對照組以同體積蒸餾水灌胃。實驗期間小鼠自由 飲水及攝食，連續(xù)灌胃 15 d 后進行各項抗疲勞指標 的測定。實驗開始及結(jié)束時用電子秤稱量小鼠體 重。

1. 2. 3 小鼠力竭游泳實驗

末次灌胃 30 min 后， 各組隨機抽取 8 只小鼠，于鼠尾根部固定其體重 5% 鉛皮，放入水溫為( 30. 0 ± 2. 0) ℃、水深 30 cm 的 恒溫游泳箱中，每個水箱 1 次放入 4 只小鼠。將小 鼠頭部沉入水中 10 s 內(nèi)不返回水面視為力竭，用秒 表記錄自游泳開始至力竭死亡的時間，即小鼠的游 泳時間。

1. 2. 4 小鼠全血乳酸測定

末次灌胃 30 min 后， 各組隨機抽取 8 只小鼠，眼眶采血 0. 1 mL，然后負 重游泳( 負體重的 4% ) 10 min，休息 30 min 后再次 眼眶采血 0. 1 mL。試管編號，各管加入 0. 6 mL 蛋 白沉淀劑混勻，3 500 ～ 4 000 r/min 離心 10 min，取 上清液進行測定，具體步驟按相應(yīng)試劑盒說明書操 作。

1. 2. 5 小鼠血清尿素氮測定

末次灌胃 30 min 后，各組隨機抽取 8 只小鼠，于 30℃ 的水中無負重 游泳 90 min，撈出小鼠擦干，休息 30 min 后拔眼球 采血約 0. 5 mL( 不加抗凝劑) 。放入 4℃冰箱中約 3 h，全血凝固后 2 000 r/min 離心 15 min，取血清備 用。血清中的尿素氮與二乙酰肟反應(yīng)生成紅色物 質(zhì)，根據(jù)色澤深淺來計算尿素氮含量，具體步驟按相 應(yīng)試劑盒說明書進行。

1. 2. 6 小鼠運動后肝糖原測定

末次灌胃 30 min 后，各組隨機抽取 8 只小鼠，于 30℃ 的水中無負重 游泳 90 min，撈出擦干休息 30 min 后立即脫頸處死 小鼠，取新鮮肝臟標本經(jīng)生理鹽水漂洗后，濾紙吸 干，稱重; 按樣本重量( mg) ∶ 堿液體積( μL) = 1∶ 3，一起加入試管中，沸水浴煮 20 min，流水冷卻; 將 糖原水解液進一步制備成糖原檢測液，具體步驟按 相應(yīng)試劑盒說明書進行。

2 結(jié) 果

抗 NDV 和 AIV 血清型 H9 抗原血凝抑制抗體 ( HI) 效價的測定( log2 ) 如表 1，結(jié)果顯示: 活性免疫 球蛋白蛋黃粉對 NDV 和 AIV 血清型 H9 兩種抗原 的血凝抑制抗體( HI) 效價均很高，分別為達到 log2 的 7 和 9，但在普通蛋黃粉和生理鹽水對照組均未 檢測到抗體( 表 1) 。

空白對照組、蛋黃粉對照組、低濃度組和高濃度 組小鼠 負 重 游 泳 時 間 分 別 為 ( 450. 38 ± 44. 48 ) 、 ( 482. 10 ± 72. 16 ) 、( 519. 25 ± 109. 99 ) 、( 3059 ± 885. 41) s，實驗組與空白對照組比較，小白鼠負重游 泳時間明顯延長，高濃度組尤為顯著，各實驗組與空 白對照組對比差異顯著( P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) 。表 明活性免疫球蛋白蛋黃粉可以明顯延長實驗小白鼠 的負重游泳時間，即能夠有效提高小白鼠的運動耐 受能力。

3 討 論

疲勞是涉及多種生理生化因素的綜合過程，是 體力或腦力活動到一定程度時機體必然會產(chǎn)生的一 種正常生理現(xiàn)象，抗疲勞效果包含延緩疲勞的產(chǎn)生 和加快疲勞的消除。運動、生活、工作過程中，疲勞 的發(fā)生不可避免，針對疲勞問題，傳統(tǒng)的藥物干預(yù)， 可能對機體造成毒副作用。補充營養(yǎng)元素對疲勞進 行干預(yù)，是一種安全無毒副作用的有效措施。運動 過程中合理改善飲食，增加營養(yǎng)素的攝入，如蛋白 質(zhì)、碳水化合物或脂肪酸等，可產(chǎn)生一定的抗疲勞效果。

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