疼痛是指組織損傷或與潛在的組織損傷相關(guān)的 一種軀體感覺(jué)和情感經(jīng)歷。鎮(zhèn)痛藥主要通過(guò)抑制中 樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)來(lái)發(fā)揮其鎮(zhèn)痛作用。 中樞性鎮(zhèn)痛藥（如阿片類）是與中樞中相關(guān)受體結(jié)合 產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作 用，但 此 類 藥 物 多 具 有 成 癮 性。蟬擬 青霉（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｃｉｃａｄａｅ）為大 蟬 草 （Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｃｉｃａｄａｅＳ－ｈｉｎｇ）的分生孢子無(wú)性型階段。蟬花是蟬 在土中的若蟲(chóng)被蟬擬青霉寄生致死的帶菌尸體，在 其頭部長(zhǎng)菌絲 形 成 的 孢 梗 束 似 花 蕾 故 名 蟬 花，由 于蟬花生長(zhǎng)的地理位置、生態(tài)環(huán)境的不同，導(dǎo)致蟬花 的形態(tài)各異。

１ 材料與方法

１．１ 材料

１．１．１ 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ＳＰＦ級(jí)昆明種小鼠，雌雄各半，體 重２０ｇ±２ｇ，由中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)提 供，許可證 ＳＣＸＫ（軍）２０１２－００１１。雌雄 分 籠 在 室 溫為２２℃±２℃，相對(duì)濕度在４０％～６０％的條 件 下 適應(yīng)性飼養(yǎng)３ｄ，給藥前禁食不禁水。

１．１．２ 試 驗(yàn)

菌 株 ２４ 株 蟬 擬 青 霉 分 別 采 自 貴 州 （ＧＺ）、四川（ＳＣ）、重慶（ＣＱ）、云南（ＹＮ）、浙江（ＺＪ）、 海南（ＨＮ）、陜西（ＳＸ）、廣西（ＧＸ）及韓國(guó)（Ｋｏｒｅａ）的 蟬花，經(jīng)分離鑒定純化后保存于貴州大學(xué)真菌資源 研究所。

１．１．３ 主要試劑

羅通定（含量＞９７％），大連美侖 生物技術(shù)有限公司；氯化鈉，天津市科密歐化學(xué)試劑 有限公司；冰醋酸（分析純），天津市富宇精細(xì)化工有 限公司；羧甲基纖維素鈉（ＣＭＣ－Ｎａ），天津市永大化 學(xué)試劑有限公司。

１．１．４ 主要儀器

生化培養(yǎng)箱（ＨＰＤ－１５０）、恒溫恒 濕智能搖 床（ＺＷＹ－Ｃ２１１２Ｄ），購(gòu)自常州市華普教學(xué) 儀器有 限 公 司；超 凈 工 作 臺(tái)（ＢＨＣ－１３００ＩＩＡ／Ｂ２），購(gòu)自蘇州凈化設(shè)備有限公司；臺(tái)式低速離心機(jī)（ＴＤＺ５－ ＷＳ），購(gòu)自湘儀公司；可調(diào)高 速 勻 漿 機(jī)（ＦＳ－１），購(gòu)自 常州國(guó)華電器有限公司；電子分析天平（ＦＡ２２０４Ｎｄ ＝０．０００１ｇ），購(gòu)自 上 海 箐 海 儀 器 有 限 公 司；滅 菌 鍋 （ＧＲ６０ＤＡ），購(gòu)自廈門(mén)致微儀器有限公司；超純水機(jī) （Ｅｘｃｅｅｄ－Ｃｃ－２４），購(gòu)自成都艾柯水處理設(shè)備有限公 司；電熱鼓 風(fēng) 干 燥 箱（ＧＺＸ－９１４０ＭＢＥ），購(gòu)自上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。

１．２ 方法

１．２．１ 培養(yǎng)基與試劑制備

液體培養(yǎng)基：取葡萄糖 ２０．０ｇ，蛋白胨３．０ｇ，酵母膏２．０ｇ，ＫＨ２ＰＯ４１．０ｇ， ＭｇＳＯ４０．５ｇ，超純水定容至１０００ｍＬ，滅菌備用。 ＰＤＡ 斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯２００ｇ，葡萄 糖２０ｇ， 瓊脂２０ｇ，超純水定容至１０００ｍＬ，滅菌，制成試管 斜面，備用。 ３５ｇ／Ｌ羅通定的配制：精確稱取羅通定標(biāo)準(zhǔn)品 粉末３．５ｇ，用１０ｇ／ＬＣＭＣ－Ｎａ溶液溶解定容至１００ ｍＬ。 ７ｍＬ／Ｌ冰醋酸溶液配制：精確量取冰醋酸０．７ ｍＬ，用滅菌超純水定容至１００ｍＬ，現(xiàn)配現(xiàn)用。

１．２．２ 蟬 擬 青 霉 菌 絲 體 提 取 液 制 備

參 照 譚 艾 娟方法制備。 菌種活化：將菌接種到 ＰＤＡ 試管斜面上，２５℃ 恒溫培養(yǎng)７ｄ，備用。 種子培養(yǎng)：用 接 種 環(huán) 將 已 活 化 的 試 管 斜 面 菌 種 接種到裝有５０ｍＬ 液體培養(yǎng)基的２５０ｍＬ的三角瓶 中，２５℃、１５０ｒ／ｍｉｎ搖床振蕩培養(yǎng)７２ｈ～９６ｈ。 發(fā)酵培養(yǎng)：將種子培養(yǎng)液按 ５％（７．５ｍＬ）的接種 量接種到裝有１５０ｍＬ液體培養(yǎng)基的５００ｍＬ的三角 瓶中，２５℃、１５０ｒ／ｍｉｎ搖床振蕩培養(yǎng)７２ｈ～９６ｈ。 不同濃度蟬擬青霉菌絲體提取液的配制：將上述 搖瓶培養(yǎng)好的菌絲４０００ｒ／ｍｉｎ離心１０ｍｉｎ，去上清， 稱重，用玻璃勻漿器破碎細(xì)胞，分別按菌絲體：超純水 ＝４、８、１６（ｇ∶Ｖ）的 比 例，加 入 超 純 水 浸 提，然 后， ４０００ｒ／ｍｉｎ離心１０ ｍｉｎ，取上 清 液，制 成 含 有１．２５、 ２．５０、５．００ｇ／ｋｇ的蟬擬青霉菌絲體提取液，備用。

１．２．３ 限量試驗(yàn)

參 照 徐 叔 云方法，取 小 鼠２０ 只，隨機(jī)分為２組，每組１０只，雌雄各半。第１組為 蟬擬青霉組，一次經(jīng)口給予０．２ｍＬ／１０ｇ的蟬擬青 霉菌菌絲體提取液，劑量為２０．００ｇ／ｋｇ；第２組為空 白對(duì)照組，經(jīng)口一次 給 予 等 體 積 的 生 理 鹽 水。連 續(xù) 觀察１４ｄ，記錄染藥期間小鼠每天表現(xiàn)并于０、３、７、 １４ｄ稱重，試驗(yàn)結(jié)束，后頸椎脫臼處死小鼠，剖檢，稱 取小鼠臟器重量，計(jì)算臟器系數(shù)（臟器系數(shù)＝臟器質(zhì) 量／動(dòng)物質(zhì)量×１００％），并觀察病理變化。

１．２．４ 不同劑量蟬擬青霉菌菌絲體提取液的鎮(zhèn)痛作用觀察

為了證明蟬擬青霉是否有鎮(zhèn)痛效果并確定 對(duì)比試驗(yàn)的給藥劑量，選?。玻粗曛猩L(zhǎng)活性最好的 ２株 ＹＮ－１和ＳＣ－４蟬擬青霉應(yīng)用小鼠扭體法，考 察其菌絲體提取液不同劑量的鎮(zhèn)痛作用，取小鼠６０ 只雌雄各半，隨 機(jī) 分 為 ５ 組，每 組 １２ 只，陰性 對(duì) 照 組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組 和 高、中、低試驗(yàn)組分別灌服等 量生理鹽水、３５ｇ／Ｌ羅通定和１．２５、２．５０、５．００ｇ／ｋｇ 的蟬擬青霉菌絲體提取液，每 次 ０．２ ｍＬ／１０ｇ， １次／ｄ，連續(xù)３ｄ；于末 次 給 藥３０ ｍｉｎ 后，腹腔 注 射 ０．７％冰醋酸，立即計(jì)時(shí)并觀察小鼠疼痛扭體反應(yīng)的 潛伏期及產(chǎn)生扭體反應(yīng)后１５ｍｉｎ內(nèi)的扭體次數(shù)，按 下列公式計(jì)算鎮(zhèn)痛百分率。 鎮(zhèn)痛百分率＝（陰 性 組 平 均 扭 體 次 數(shù)－給 藥 組 平均扭體次數(shù)）／陰性組平均扭體次數(shù)）×１００％。

１．２．５ 不同來(lái)源蟬擬青霉菌株鎮(zhèn)痛作用對(duì)比研究

對(duì)２．４的鎮(zhèn)痛結(jié)果分析，采用劑量為２．５０ｇ／ｋｇ，取小 鼠３１２只雌雄各半，隨機(jī)分為２６組，每組１２只，應(yīng) 用小鼠扭體法對(duì)比考察２４株蟬擬青霉菌菌絲體提 取液的鎮(zhèn)痛效果，以期篩選出具有顯著鎮(zhèn)痛作用的 蟬擬青霉菌株。

１．２．６ 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)均采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤” 表示。數(shù)據(jù)均 采 用 ＳＰＳＳ統(tǒng)計(jì) 軟 件 進(jìn) 行 處 理，進(jìn) 行 方差統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 分 析，Ｐ ＞０．０５ 表示 差 異 不 顯 著，Ｐ ＜ ０．０５表示差異顯著，Ｐ＜０．０１表示差異極顯著。

２ 結(jié)果

與生理鹽水組相比較，陽(yáng)性藥物羅通定的潛伏 期延長(zhǎng)（Ｐ＜０．０５）、扭體次數(shù)下降（Ｐ＜０．０１）和鎮(zhèn)痛 百分率最好。ＹＮ－１、ＳＣ－４的高中低劑量均能延長(zhǎng)潛 伏期，其中 ＹＮ－１潛伏期延長(zhǎng)作用明顯（Ｐ＜０．０５）， 從對(duì)照組的４．２４ｍｉｎ延長(zhǎng)至７．４４ｍｉｎ，超過(guò)羅通定。ＹＮ－１、ＳＣ－４菌絲體高、中劑量組均能顯著地 降 低 冰 醋酸所致小鼠扭體次數(shù)（Ｐ＜０．０５）（表３）。２株菌均 能較大程度提高鎮(zhèn)痛百分率，ＹＮ－１高、中、低組的鎮(zhèn) 痛百分 率 分 別 為 ５９．４８％、６３．２２％ 和４３．１０％；ＳＣ－４高、中、低組的鎮(zhèn)痛百分率分別為４５．９８％、５５．７５％和 ４０．２３％。因此，２株蟬擬青霉菌菌絲體提取液均有 鎮(zhèn)痛作用，其中劑量組（２．５０ｇ／ｋｇ）鎮(zhèn)痛效果最好。

3 討論

化學(xué)刺激鎮(zhèn)痛模型中的醋酸致小鼠扭體模型， 主要是通過(guò)注射冰醋酸后，引起腹腔急性炎癥反應(yīng)， 產(chǎn)生疼痛，作用部位在外周神經(jīng)系統(tǒng)，用于考察外周 性鎮(zhèn)痛藥物鎮(zhèn)痛作用的藥物，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明具有較好鎮(zhèn)痛活性的菌株主要集中在 全國(guó)云貴川３個(gè)省份及韓國(guó)，而云貴川３個(gè)省相鄰， 氣候環(huán)境條件相似，證明蟬擬青霉的鎮(zhèn)痛活性會(huì)隨 著地形氣候的改變而改變。本研究中發(fā)現(xiàn)，２４株蟬 擬青霉菌菌絲體提取液均有不同程度的外周鎮(zhèn)痛作 用，鎮(zhèn)痛百分率 在３．４％～６４．８％之間，其 中 其 ＧＺ－３、ＹＮ－１及 Ｋｏｒｅａ－１的鎮(zhèn)痛效果較好，與羅通定相近 有很大的研究潛力。



 

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