材料

VD.650桌上式潔凈工作臺(tái)購(gòu)自蘇州凈化設(shè)備有限公 司；YXQ-LS-18SII手提式壓力蒸汽滅菌器購(gòu)自上海博 迅實(shí)業(yè)有限公司；THz-103B恒溫培養(yǎng)搖床購(gòu)自上海一恒 科學(xué)儀器有限公司；UV-2100紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)購(gòu)自 上海尤尼柯儀器有限公司；AA-7000原子吸收分光光度 計(jì)購(gòu)自日本島津公司；varioELcube 元素分析儀購(gòu)自德國(guó) Elementar公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀購(gòu)自德國(guó)IKA公司；FD-1c-50 冷凍干燥機(jī)購(gòu)自北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；CR22冷 凍離心機(jī)購(gòu)自日本Hitachi公司。

方法

在 20mL 的 ddH2O 水中加入 10g 藥渣，放置于搖床中混合5min。取出混勻的液體后，使用 移液槍分別將混合液稀釋為1×10-1、1×10-6，從每個(gè)梯 度的混合液分別中吸取 200uL 液體至 Ashby 無(wú)磷固體培 養(yǎng)基中，用滅過(guò)菌的涂布棒將培養(yǎng)基上的混合液涂抹均 勻，晾干后于 28℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng) 2 天。從生長(zhǎng)好的 Ashby無(wú)磷固體培養(yǎng)基中挑選長(zhǎng)勢(shì)良好的單菌落，通過(guò)平 板劃線法對(duì)選取的單菌落進(jìn)行分離純化，將最終得到的 單菌株移至斜面，放入4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩呐囵B(yǎng)基上選取長(zhǎng)勢(shì)良好的單 菌落移至100mL無(wú)磷液體培養(yǎng)基中，放置于28℃搖床中 以180rpm生長(zhǎng)3天得到種子液。將生長(zhǎng)好的菌液于離心 機(jī)中6000rpm離心10min，將得到的菌液沉淀取一部分干 燥至粉末后稱(chēng)重，并以中藥菌體.1 的方式對(duì)其進(jìn)行命 名。將剩余菌液沉淀分為 3 份，分別移至 250mL532 的 Ashby無(wú)磷液體培養(yǎng)基中，放入28℃搖床中180rpm生長(zhǎng)7 天。取出培養(yǎng)好的菌液，放入離心機(jī)中離心處理，上清液 旋蒸后冷凍干燥獲得粉末，對(duì)獲得的粉末稱(chēng)重后以中藥 發(fā)酵液-1的方式命名；離心得到的沉淀放入50℃烘箱中干 燥處理后進(jìn)行稱(chēng)重，得到的粉末以中藥菌體-2的方式命名。

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