采用 CdTe 量子點(diǎn)偶聯(lián)志賀氏菌抗體作為 熒光標(biāo)記,制備一種用于能快速可視化檢測(cè)志賀氏菌 的免疫熒光試紙條,該試紙條可實(shí)現(xiàn)對(duì)肉品中志賀氏菌的快速、簡(jiǎn)便、可視化定量檢測(cè)。JEM-2100 高分辨率透射電子顯微鏡:日本電子 株式會(huì)社;F-2500 FL 熒光光譜儀:日本 Hitachi 公司; pHS-3C 酸度計(jì):上海雷磁公司;HM3230 點(diǎn)膜儀、 ZQ2002 自動(dòng)切條儀:上海金標(biāo)生物科技有限公司; WI95549 冷凍干燥儀:東西儀(北京)科技有限公司; GZX-9240MBE 電熱恒溫干燥箱:上海博迅實(shí)業(yè)有限公司。
在硝酸纖維膜上用 HM3230 點(diǎn)膜儀噴涂志賀氏 菌鼠抗和羊抗鼠二抗形成檢測(cè)帶和質(zhì)控帶,將量子點(diǎn) 標(biāo)記好的志賀氏菌抗體均勻地噴涂在樣品墊上,將樣 品墊、硝酸纖維膜和吸水墊依次組裝,用試紙條切刀 切割成試紙條,干燥箱干燥后封裝,避光保存于 4 ℃ 備用。將志賀氏菌菌 懸 液 10 倍梯度稀釋制備的 1× 102 CFU/mL~1×108 CFU/mL 志賀氏菌菌液分別滴加到 試紙條加樣孔中,反應(yīng) 5 min,待免疫反應(yīng)達(dá)到平衡后, 在紫外燈下觀察質(zhì)控線和檢測(cè)線,每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定 6 次。結(jié)果判定:目視 T 帶的熒光強(qiáng)度,與空白對(duì)照,熒 光越弱,代表待測(cè)溶液中含被測(cè)物的濃度越低,出現(xiàn) 熒光的最低濃度即為最低檢測(cè)限。試驗(yàn)顯示制備的熒光免疫層析試紙條與其它致 病菌均無交叉反應(yīng),表明制備的試紙條特異性較好。