在油田注入水的檢測系統(tǒng)中，細(xì)菌檢測是重要 指標(biāo)。油田注水系統(tǒng)中，腐蝕性細(xì)菌造成金屬腐蝕， 管路堵塞，進(jìn)而導(dǎo)致注水壓力逐年提高，地層壓力 逐步降低，嚴(yán)重影響油田正常生產(chǎn)。細(xì)菌檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，對指導(dǎo)油田生產(chǎn)具有重要作用。在 《SY/T 0532-2012 油田注入水細(xì)菌分析方法絕跡稀釋法》 中，推薦對鐵細(xì)菌、硫酸鹽還原菌和腐生菌這三種 注水常見危害細(xì)菌采用絕跡稀釋法進(jìn)行測定。

95%乙醇（分析純），脫脂棉，1 mL 注射器（0.02 mL 分度），上海博迅 BPX-272 電熱恒溫培養(yǎng)箱，沃特 KBC 系列細(xì)菌測試瓶。

根據(jù)需要對鐵細(xì)菌、硫酸鹽還原菌和腐生菌分 別進(jìn)行單組測試和多組測試。多組實(shí)驗(yàn)用五個(gè)裝有 相應(yīng)菌類培養(yǎng)基測試瓶依次標(biāo)號。 用酒精棉球?qū)κ旨伴_蓋后的測試瓶進(jìn)行消毒； 用無菌注射器吸取 1 mL 水樣注入測試瓶中，搖勻； 另取無菌注射器，從一號瓶吸取 1 mL 水樣注入二號瓶，搖勻；依次操作至最后一個(gè)樣品瓶為止。放 入 35 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)硫酸鹽還原菌 14 天觀察，測試瓶中液體由無色變?yōu)楹谏?，即為陽?結(jié)果。培養(yǎng)腐生菌 7 天后觀察，液體由紅變黃或渾 濁，為陽性結(jié)果。培養(yǎng)鐵細(xì)菌 7 天后觀察，測試瓶 中液體產(chǎn)生渾濁或紅棕色沉淀，為陽性結(jié)果。

根據(jù)重復(fù)次數(shù)（測試組數(shù))的每級結(jié)果查《SY/T 0532-2012 油田注入水細(xì)菌分析方法絕跡稀釋法》 附表附錄，乘以相應(yīng)的級數(shù)得出檢測結(jié)果。

測量不確定度的來源包括 A 類不確定度和 B 類 不確定度。用統(tǒng)計(jì)分析的方法對規(guī)定測量條件下測 得的量值進(jìn)行測量不確定度分量評定的方法為 A 類 不確定度；基于量值、儀器準(zhǔn)確度、校準(zhǔn)記錄等方 法評定的不確定度為 B 類不確定度。經(jīng)分析，絕跡 稀釋法結(jié)果不確定度的來源主要是取樣和結(jié)果重復(fù) 性引入的不確定度。其中屬于 A 類不確定度的為結(jié) 果重復(fù)性引入的不確定度，屬于 B 類不確定度的為 取樣 1 mL 引入的不確定度。

樣品的梯度稀釋采用 1 mL 玻璃注射器，進(jìn)行 反復(fù) 5 次吸取注射。根據(jù)玻璃量器規(guī)定，1 mL 玻璃 注射器（A 級）允差為±0.008。其標(biāo)準(zhǔn)不確定度 0.008/√3=0.004 6。在 5 次使用過程中產(chǎn)生的不確定 度為√5 ? 0.004 6?=0.010 3。在室溫 25 ℃操作時(shí)， 根據(jù)水的膨脹系數(shù)，5 次使用過程中產(chǎn)生的不確定度為 5×5×2.1×10-4÷√3=0.003 0。則梯度稀釋過 程產(chǎn)生的不確定度 U 稀 =√ 0.010 3? ? 0.003? =0.0107。取樣時(shí)引入的相對 標(biāo)準(zhǔn)不確定度為 Urel(稀)= 0.010 7/5=0.002 1。

（1）絕跡稀釋法是結(jié)合了微生物學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)的 一種定量檢測法。待測樣品經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，根據(jù)生 長的最高稀釋濃度和最低稀釋濃度，應(yīng)用泊松分布 計(jì)算出樣品最大可能數(shù)。絕跡稀釋法所得到結(jié)果本 身就包括了一定的概率。但是在實(shí)際操作過程中， 吸取溶液等操作步驟都會(huì)另外帶入不確定度。因此需對整個(gè)過程進(jìn)行不確定度評價(jià)。

（2）影響整個(gè)過程的不確定度因素很多，除了 上述不確定度之外，還有樣品保存引起的不確定度， 檢測環(huán)境引起的不確定度，細(xì)菌瓶的質(zhì)量引起的不 確定度，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)過程中的不確定度，人員 讀數(shù)引起的不確定度。它們對合成不確定度的貢獻(xiàn) 較小，所以在此次評定過程中沒有計(jì)入上述因素。

（3）細(xì)菌是以幾何速度增殖，所以不確定度評 定過程按取對數(shù)計(jì)算比較合理。

（4）在 A 類不確定度和 B 類不確定度同時(shí)評 定時(shí)，儀器分辨力引入的不確定度和重復(fù)性引入的 不確定度之間，應(yīng)取其大者。