由血栓引起的急性心肌梗死、腦卒中等心腦血 管疾病，嚴(yán)重危害著人類健康和生命。從海洋生物 體內(nèi)尋找和開發(fā)抗凝血和抗血栓活性物具有廣泛的 應(yīng)用前景。隨著人們對海洋多糖抗凝血、抗血栓、降血脂及其他藥理活性研究的不斷深入，多糖已成 為生物醫(yī)藥和化學(xué)領(lǐng)域共同關(guān)注的熱點，硫酸多糖 因其具有強陰離子性，可表現(xiàn)出不同程度的抗凝血活性。

SPF 級 Wistar 大鼠，雄性，體質(zhì)量 180～200 g， 購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證 號 SCXK（京）2012-0001。飼養(yǎng)于天津藥物研究院 新藥評價有限公司動物實驗樓（屏障環(huán)境， AAALAC 認(rèn)證）。溫度 20～26 ℃，相對濕度 40%～ 70%，不少于 15 次/h 全新風(fēng)，晝夜明暗交替時間為 12 h/12 h。

FV，產(chǎn)品批號 20120301，由深圳海王藥業(yè)有 限公司提供，平均相對分子質(zhì)量為 11 000～15 000； 低分子量肝素鈣注射液（LMWHC），產(chǎn)品批號 12105049，規(guī)格 0.4 mL∶4 100 AxaIU，由葛蘭素史 克提供。

G&G T2000 型電子天平由美國雙杰兄弟（集 團）有限公司提供；PL203 型電子天平，由梅特勒 托利多儀器（上海）有限公司提供；SDZ-A1 型體 外血栓形成儀由無錫縣電子儀器二廠提供； HPX-9052MBE 型電熱恒溫培養(yǎng)箱由上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠提供。

前期預(yù)試驗對 FV 的劑量及作用時間做了探 索，最終將 FV 的劑量設(shè)定為 20、10、5、2.5、1.25、 0.63 mg/kg，LMWHC 的臨床日使用量為 38 IU/kg， 人按 60 kg 計，大鼠按 200 g 計，按體表面積折算大 鼠的臨床等效劑量為 213 IU/kg，依此對其設(shè)定劑量 進行本研究。 參考 Reyers 法將 Wistar 大鼠隨機分為對照 組、FV 20、10、5、2.5 mg/kg 組和 LMWHC 213 IU/kg 組，每組 10 只，給藥體積為 5 mL/kg。大鼠以 1% 戊巴比妥鈉 5 mL/kg 腹腔注射麻醉后，尾靜脈給予 相應(yīng)受試品，對照組給予生理鹽水。15 min 后大鼠 腹部碘伏消毒，沿腹正中切開大鼠腹壁，分離下腔 靜脈，并于左腎靜脈下方預(yù)置絲線結(jié)扎下腔靜脈，關(guān)閉縫合腹腔，結(jié)扎 4 h 后重新打開腹腔，于結(jié)扎 線下方 2 cm 處夾閉血管，同時結(jié)扎靜脈側(cè)枝，縱行 剖開血管，觀察有無血栓形成，若血栓形成，用濾 紙吸去殘血稱血栓濕質(zhì)量后，放置于烘箱內(nèi)烘干， 再稱量血栓干質(zhì)量。計算血栓抑制率（IR）。 IR＝（對照組血栓質(zhì)量－給藥組血栓質(zhì)量）/對照組血 栓質(zhì)量

參考 Chandler 體外血栓法將 Wistar 大鼠隨機 分為對照組、FV 20、10、5、2.5 mg/kg 組和 LMWHC 213 IU/kg 組，每組 10 只，給藥體積為 5 mL/kg。大 鼠以 1%戊巴比妥鈉 5 mL/kg 腹腔注射麻醉后，尾靜 脈給予相應(yīng)受試品，對照組給予生理鹽水，15 min 后沿腹正中切開大鼠腹壁，腹主動脈迅速采血 1 mL 注入硅化的塑料管中放入血栓形成儀中，于 37 ℃ 下 18 r/min 旋轉(zhuǎn) 15 min 后自環(huán)內(nèi)傾出血栓，用濾紙 吸干殘血，稱取血栓濕質(zhì)量，血栓放置于烘箱內(nèi)烘 干再稱量血栓干質(zhì)量。計算血栓抑制率（IR）。 IR＝（對照組血栓質(zhì)量－給藥組血栓質(zhì)量）/對照組血 栓質(zhì)量

依完全隨機法將 Wistar 大鼠分為對照組、FV 20、10、5、2.5 mg/kg 組和 LMWHC 213 IU/kg 組， 每組 9 只，給藥體積為 5 mL/kg。大鼠以 1%戊巴比 妥鈉 5 mL/kg 腹腔注射麻醉后，尾靜脈給予相應(yīng)受 試品，對照組給予生理鹽水。頸部碘伏消毒，仔細(xì) 分離右側(cè)頸總動脈和左側(cè)頸外靜脈，頸外靜脈先結(jié) 扎靜脈遠(yuǎn)心端，于近心端剪開一小口，將事先準(zhǔn)備 好聚乙烯管（管中放置一根預(yù)先稱重的 4 號縫合線 約 6 cm，并將 50 U/mL 肝素溶液充滿管腔）向近 心端插入并結(jié)扎固定。右側(cè)頸總動脈先用血管夾夾 住近心端，剪開一個小口，將管向近心端插入并結(jié) 扎固定。給藥 15 min 后放開血管夾計時 15 min， 之后將線取出稱量濕質(zhì)量、干質(zhì)量。計算血栓抑制 率（IR）。 IR＝（對照組血栓質(zhì)量－給藥組血栓質(zhì)量）/對照組血 栓質(zhì)量

計量資料均以?x±s 表示，應(yīng)用 SPSS 20.0 統(tǒng)計 軟件分析。先進行方差齊性檢驗，方差齊時以單因 素方差分析進行整體比較，兩兩比較采用 t 檢驗； 方差不齊采用非參數(shù)檢驗進行整體比較，兩兩比較 采用 Kruskal-Wallis 檢驗。

與對照組比較，F(xiàn)V 20、10、5、2.5 mg/kg 組均 能夠明顯降低大鼠下腔靜脈的血栓濕質(zhì)量和干質(zhì)量 （P＜0.05、0.01），陽性藥 LMWHC 組能夠明顯降低 大鼠下腔靜脈的血栓干濕質(zhì)量（P＜0.01）。FV 對血栓濕質(zhì)量的抑制率最高可達(dá) 77.3%，對血栓干質(zhì)量 的抑制率最高可達(dá) 74.9%。劑量相關(guān)性的線性擬合方 程分別為 Y＝−0.377X＋11.70（r＝0.978）、Y＝ −0.173X＋5.62（r＝0.901），劑量相關(guān)性較好，提示 FV 有明顯的抑制靜脈血栓形成的作用。與對照組比較，F(xiàn)V 20、10、5、2.5 mg/kg 組均 能夠明顯降低大鼠體外形成的血栓濕質(zhì)量（P＜ 0.05、0.01），F(xiàn)V 20、10、5 mg/kg 組均能夠明顯降 低大鼠體外形成的血栓干質(zhì)量（P＜0.05、0.01）。 陽性藥 LMWHC 組能明顯降低大鼠體外形成的血栓 干濕質(zhì)量（P＜0.01）。FV 對血栓濕質(zhì)量的抑制率最高可達(dá) 94.3%，對血栓干質(zhì)量的抑制率最高可達(dá) 96.6%。劑量相關(guān)性的線性擬合方程分別為 Y＝ −0.002 X＋0.061（r＝0.997）、Y＝−0.000 1 X＋0.015 （r＝0.768），血栓濕質(zhì)量的 r 值為 0.997，劑量相關(guān) 性明顯，而血栓干重質(zhì)量的 r 值為 0.768，劑量相關(guān) 性稍差，提示 FV 具有抑制體外血栓形成作用。

血栓性疾病是一類嚴(yán)重危害人類健康的疾病， 其發(fā)病率和死亡率都很高，目前國內(nèi)外都在尋找組 成均一、活性專一，且相對分子質(zhì)量小、抗凝血活 性低而抗血栓作用較強的新型類肝素藥物，發(fā)現(xiàn)巖 藻多糖具有上述特點，其藥理活性及機制已經(jīng)多方 面的報道。FV 是從海帶等褐藻中提取出來的巖 藻聚糖硫酸酯，經(jīng)過化學(xué)降解、修飾而得到的陰離 子物質(zhì)。本文對其抗血栓活性進行了研究。靜脈血栓主要由于血流緩慢或瘀滯、凝血因子 聚集而導(dǎo)致血液凝固，所有凝血酶的激活是主要因 素之一。結(jié)扎大鼠下腔靜脈使血流瘀滯，啟動內(nèi)源 性凝血系統(tǒng)，促進靜脈血栓的形成。



 

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