結(jié)核病是一種由結(jié)核分枝桿菌（ＭＴＢ）感染引起 的傳染病，嚴重危害著人類的生命健康。根據(jù)世界衛(wèi) 生組織（ＷＨＯ）２０１７年全球結(jié)核病報告顯示，２０１６年 全球結(jié)核病發(fā)病的人數(shù)為１０４０萬，中國是全球３０個 結(jié)核病高負擔國家之一。此外，在我國甲、乙類傳 染病病死率中，肺結(jié)核排名第２位，其實驗室診斷率 不足４０％。由于結(jié)核病的診斷較為復雜，既往的細 菌病原體檢測、結(jié)核菌素皮膚試驗（ＴＳＴ）、抗結(jié)核抗 體檢測及影像學檢查等診斷方法遠遠不能滿足臨床 需求。經(jīng)過不斷地研究，以 Ｔ 淋巴細胞免疫為基礎(chǔ) 的體外γ－干擾素釋放試驗（ＩＧＲＡｓ）近年來在臨床得 到廣泛應用。ＩＧＲＡｓ檢測的基本原理是 ＭＴＢ 特異 性抗原－早期分泌抗原６（ＥＳＡＴ－６）和培養(yǎng)濾液蛋白１０ （ＣＦＰ－１０）在體外刺激全血中的 Ｔ 淋巴細胞產(chǎn)生 γ干 擾 素 （ＩＦＮ－γ），通 過 酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 測 定 實 驗 法 （ＥＬＩＳＡ）測 定 ＩＦＮ－γ 水 平 來 判 斷 受 檢 者 是 否 感 染 ＭＴＢ。雖然ＩＧＲＡｓ已成為國內(nèi)外結(jié)核診療指南推薦 的重要實驗室檢測方法，是臨床診斷結(jié)核病的重 要輔助手段，但在檢測過程中，除了有陰性結(jié)果、陽性 結(jié)果外，還會產(chǎn)生一定比例的不確定結(jié)果（ＩＴＲｓ）。

回顧２０１４年７月至２０１８年７月在 本院１７８１例可疑結(jié)核感染患者或需排除結(jié)核感染患 者的ＩＧＲＡｓ檢測結(jié)果，年齡為（４８．２３±１９．８４）歲，其 中男１１３９例，女６４２例。按不同年齡分為３組，＜１８ 歲組１６３例，１８～６５歲組１１００例，≥６５歲組５１８例。

ＩＧＲＡｓ試劑盒（北京萬泰生物藥 業(yè)股 份 有 限 公 司），恒溫培養(yǎng)箱 （上海博迅公司）， ＭｕｔｉｓｋａｎＦＣ酶聯(lián)免疫檢測儀（賽默飛世爾儀器有限公司）。

嚴格按照試劑盒說明書操作。 采集４ｍＬ肝素鋰抗凝靜脈全血，２ｈ之內(nèi)送至實驗 室。按 每 管 １ ｍＬ 全 血 分 裝 至 本 底 對 照 培 養(yǎng) 管 （Ｎ 管）、測試培養(yǎng)管（Ｔ 管）、陽性對照培養(yǎng)管（Ｐ管），輕 柔顛倒混勻５次后，將培養(yǎng)管直立于３７ ℃恒溫箱中， 溫育２２～２４ｈ。將培養(yǎng)后的培養(yǎng)管以３０００ｒ／ｍｉｎ，離 心 １０ ｍｉｎ，通 過 ＥＬＩＳＡ 檢 測 上 清 液 中 的 γ－干 擾 素 （ＩＦＮ－γ）水平，酶標儀在波長４５０ｎｍ 處測定其吸光度Ａ，根據(jù)試劑盒中校準品制作標準曲線，計算ＩＦＮ－γ 水平。

由６個標準液的吸光度 Ａ 值與相應濃度計算得出的相關(guān)系數(shù)（ｒ）≥０．９９；４００ ｐｇ／ｍＬ的標準液的平均吸光度Ａ 值＜１．０。 １．３．３ 判斷標準 所得不確定結(jié)果均需重新采集樣 本復查，以排除實驗因素引起不確定結(jié)果，復查后仍 為不確定，則判定為不確定結(jié)果。

回顧２０１４年７月至２０１８年７月 例患者的ＩＧＲＡｓ檢測結(jié)果，用 Ｅｘｃｅｌ２００７軟件建立 數(shù)據(jù)庫，用ＳＰＳＳ２２．０軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料 用百分率表示，組間比較用χ ２ 檢驗，采用二元Ｌｏｇｉｓｔｉｃ 回歸進行單因素與不確定結(jié)果的分析，Ｐ＜０．０５表示 差異有統(tǒng)計學意義。

１７８１ 例ＩＧＲＡｓ檢測樣 本，陽性５６９例（３１．９５％），陰性１１５１例（６４．６３％）， 不確定結(jié)果６１例（３．４３％）。１７８１ 例ＩＧＲＡｓ檢測樣本中，男性１１３９例，女性６４２例，男 性陽性率為３３．４５％，女性陽性率為２９．２８％，差異無統(tǒng)計學意義（χ ２＝３．２０８，Ｐ＝０．０７５）；男、女患者ＩＴＲｓ 分別 為 ３．３４％，３．５８％，差 異 無 統(tǒng) 計 學 意 義 （χ ２ ＝ ０．０７３，Ｐ＝０．７８４）。１７８１ 例ＩＧＲＡｓ檢測樣本中，＜１８歲組的患者ＩＧＲＡｓ陽性 率明顯低于１８～６５歲組和≥６５歲組，差異有統(tǒng)計學 意義（χ ２ ＝２８．４４８，Ｐ＝０．０００）；與 １８～６５ 歲 組 比 較，＜１８歲組和≥６５歲組ＩＴＲｓ發(fā)生率較高，差異均 有統(tǒng)計 學 意 義 （χ ２ 值 分 別 為 １０．５８４、９．０１５；Ｐ ＝ ０．００１、０．００３）。＜１８歲組和≥６５歲組ＩＴＲｓ發(fā)生率 比較，差異無統(tǒng)計學意義（χ ２ ＝０．７２２，Ｐ＝０．３９６）。

對６１例可疑結(jié)核感染患者ＩＧＲＡｓ的ＩＴＲｓ標本進行 回訪，剔除４例資料不全患者，經(jīng)二元ｌｏｇｉｓｔｉｃ回歸分 析，自身免疫性疾?。ǎ希?為２．８４；９５％ＣＩ 為１．５０～ ５．３９；Ｐ＝０．００１）、ＨＩＶ 感染患者（ＯＲ 為３．０４；９５％ ＣＩ為 １．２６～７．３５；Ｐ＝０．０１３）的ＩＴＲｓ與確定結(jié)果 （陰性／陽性）差異有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）。

目前，大量研究評估了ＩＧＲＡｓ在疑似結(jié)核病患者診斷中的臨床應用價值，而較少研究ＩＧＲＡｓ檢測中 出現(xiàn)的不確定結(jié)果。ＤＩＥＬ等研究顯示，ＩＧＲＡｓ的不確定結(jié)果發(fā)生率在３％～２１％，不確定的結(jié)果可能限 制ＩＧＲＡｓ使用的有效性，影響結(jié)核病的診斷和治療。 因此，除了關(guān)注ＩＧＲＡｓ檢測的陰性或陽性結(jié)果之外， 還應重視ＩＧＲＡｓ不確定結(jié)果發(fā)生的比例和原因，為 臨床疾病的診斷和治療提供幫助。綜上所述，通過回顧分析本院檢測的可疑結(jié)核感 染患者或需排除結(jié)核感染患者ＩＧＲＡｓ的不確定結(jié)果 發(fā)生的比率及原因，發(fā)現(xiàn)不確定結(jié)果發(fā)生不僅與年齡 因素關(guān)系密切，還與患者的免疫功能狀態(tài)或免疫抑制 劑的使用密切相關(guān)。



 

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