白血病是一類(lèi)造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病。 治療白血病的方式主要是采用聯(lián)合化療，但其毒副 作用也很明顯。依據(jù)中醫(yī)學(xué)對(duì)白血病的認(rèn)識(shí)，擬益氣養(yǎng)陰方，由益氣和養(yǎng)陰的中藥組成，無(wú)清熱解毒 類(lèi)的中藥，毒副作用更小。制備大鼠含藥血清，聯(lián) 合化療藥阿糖胞苷、喜樹(shù)堿、紫杉醇，共同作用于人 白血病細(xì)胞系 KG1α 細(xì)胞，CCK8 檢測(cè)其活性，觀察 對(duì) KG1α 細(xì)胞增殖的影響。

8 周齡、清潔級(jí)雄性 Wistar 大 鼠 36 只，體質(zhì)量( 200 ± 20) g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)碼: SCXK( 滬) 2017 － 0005。實(shí)驗(yàn)室溫度 22 ～ 25 ℃、12 h 明暗循環(huán)，大鼠 自由飲水?dāng)z食。實(shí)驗(yàn)程序遵循美國(guó)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理 和使用指南》 ( 《Guide for the Care and Use of Laboratory Animals》簡(jiǎn)稱(chēng) Guide，NＲC 2011) 。KG1α 細(xì) 胞株: 購(gòu)于北納生物的 BNCC 細(xì)胞庫(kù)。

益氣養(yǎng)陰方: 黃芪 30 g、太子參 30 g、女貞子 21 g、旱蓮草 18 g、麥冬 15 g，藥材由杭 州華 東 醫(yī) 藥 提 供; 水 煎 2 次 合 并 濾 液，濃 縮 至 1. 14 g /mL，冷卻后，分裝，置于 4℃ 冰箱保存?zhèn)溆谩?胎牛血清: Hyclone Company; IMDM 培養(yǎng)基、胰酶及 雙抗: GIBCO Company; CCK8 試劑盒: 日本同仁化學(xué) 社; 喜 樹(shù) 堿: Aladdin，C111281 － 20MG; 阿 糖 胞 苷: Aladdin，C111218 － 5G; 紫 杉 醇: Aladdin，P106868 － 10MG。

Sorvall ST16Ｒ 臺(tái)式高速冷凍離心 機(jī): Thermo 公司; Sorvall ST16Ｒ 臺(tái)式低速離心機(jī): Thermo 公司; 3111 型二氧化碳 培 養(yǎng) 箱: Thermo 公 司; 細(xì)胞培養(yǎng)瓶: Fisher Scientific 公司; 細(xì)胞培養(yǎng)皿: Fisher Scientific 公司; 微量加樣器: ＲAININ 公司; 渦 旋振蕩儀: Bio － Ｒad 公司; ECLIPSE Ti － S 型倒置顯 微鏡: Nikon 公 司; 博迅BSC-1000A2生物安全柜: 1681130 － 4B 酶標(biāo)儀: Bio － Ｒad 公司。

將大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照 組和含藥血清組，根據(jù)“動(dòng)物與人體的每千克體質(zhì) 量劑量折算系數(shù)表”計(jì)算大鼠灌胃劑量，成人與大 鼠的折算系數(shù)按 6. 25 計(jì)算，大鼠灌胃劑量 1 mL / 100 g，分 2 次給藥( 每日上午 9 時(shí)和下午 15 時(shí)兩次 灌胃) ，空白組給予等量生理鹽水; 連續(xù)灌胃 5 d。 末 次 給 藥 2 h 后。大 鼠 稱(chēng) 重，10% 水 合 氯 醛 ( 3. 8 mL / kg) 腹腔注射麻醉，心臟穿刺取血，滅活， － 20℃保存?zhèn)溆谩Ｈ≌Ｅ囵B(yǎng)處于對(duì)數(shù) 生長(zhǎng)期的 KG1α 細(xì)胞，800 r /min 離心 5 min，計(jì)數(shù)板 下計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度為 5 × 104 個(gè)/mL，鋪 96 孔板， 每孔均加入0. 1 mL細(xì)胞懸液，即 5 × 103 個(gè)/well。將 含藥血清分為 5% 、10% 、15% 、20% 4 個(gè)濃度; 化療 藥物 作 用 濃 度: 阿 糖 胞 苷 160 mg /L，喜 樹(shù) 堿 0. 1 mg /L，紫杉醇 50 mg /L。設(shè)置組別為: 空白對(duì)照 組、空白血清對(duì)照組、含藥血清組( 5% 、10% 、15% 、 20% ) 、各化療藥物聯(lián)合空白血清組、化療藥聯(lián)合 15% 含藥血清組。藥物作用細(xì)胞 0、12、24、48、72 h。藥物作用細(xì)胞 0、12、 24、48、72 h 后，每孔加入 10 μL CCK8 檢測(cè)液的工 作液，設(shè)置空白對(duì)照孔，37 ℃ 避光反應(yīng) 2 h，450 nm 處讀取各孔 OD 值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果按下式計(jì)算: 細(xì)胞存 活率 ( % ) = 實(shí) 驗(yàn) 組 OD 值/空 白 對(duì) 照 組 OD 值 × 100%所有數(shù)據(jù)采用平均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差 ( x ± s) 表示，應(yīng)用 GraphPad Prism 6 統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)所 得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析制圖，方差不齊者，將 數(shù)值取對(duì)數(shù)值后進(jìn)行方差分析。P ＜ 0. 05 表示差異 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

見(jiàn)圖 1。5% 、10% 、15% 、20% 含 藥血清對(duì) KG1α 細(xì)胞從 12 h 即出現(xiàn)不同程度的增 殖抑制，隨著時(shí)間的推移，抑制效果有所減弱，以 15% 含藥血清的抑制效果最為明顯。不同濃度含藥 血清聯(lián)合化療藥對(duì)細(xì)胞均顯示出不同程度的抑制 作用。

4 討論

阿糖胞苷( cytarabine，Ara － C) 是一種核苷類(lèi)似 物，是血液腫瘤尤其是急性髓細(xì)胞白血病( acute myelocytic leukemia，AML) 誘導(dǎo)和鞏固治療的常規(guī)藥 物。在不同的方案中應(yīng)用劑量不同，在 AML 的鞏固治療中，大劑量的阿糖胞苷可以達(dá)到明顯的治療效果。但是隨著劑量越大，胞漿濃度越高，產(chǎn)生的 毒性就越大。

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