動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是一種多因 素復雜的炎癥性疾病，是引起心血管類疾病的主要 原因。動脈粥樣硬化早期發(fā)生發(fā)展的兩個關鍵因 素是循環(huán)單核細胞跨內(nèi)皮遷移進入血管壁及巨噬細 胞衍生泡沫細胞的形成。因此，抑制單核細胞遷 移、減少血管壁內(nèi)巨噬細胞的形成對于抑制動脈粥 樣硬化的發(fā)生意義重大。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

人單核細胞株 THP-1 細胞，由上海生物科學研究所細胞資源中心提供，并在實驗室進行傳 代保株；體內(nèi)實驗所用 ApoE-/-小鼠由上海 SLAC 實 驗室提供，許可證號：SCXK（上海）2017-0005；姜 黃素（生產(chǎn)批號：118-39-5，純度≥98%），西安天豐 生物科技有限公司；胎牛血清、100 U·mL-1青霉素、 100 U·mL-1鏈霉素溶液，美國 Hyclone 公司；肉豆蔻 酸佛波酯（PMA），德國達姆施塔特，Calbichem； LPS，美國 Sigma 公司；TRIzol 試劑，美國 Invitrogen 公司；LS，北京艾德萊生物科技有限公司；高遷移 率族蛋白 B1（HMGB1）、單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1） ELISA 試劑盒，南京建成生物工程研究所；二異氰酸 酯試劑盒，美國 Thermo Science 公司；聚偏二氟乙烯膜 （Milli 孔隙），美國 Bedford 公司；脂質(zhì)體 TMRNAiMAX 轉(zhuǎn) 染 試 劑 ， 美 國 InvitrogenLife Technologies 公 司 ； RT-PCR 試劑盒、WB 試劑盒，賽默飛世爾科技（中 國）有限公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，美國 Thermo Fisher Science 公司；其他試劑均為化學分析純。

1.1.2 儀器

細胞計數(shù)器，美國 Nexcelom Bioscience LLC 公司；TriStar 2 LB 942 型多功能酶標儀，德國伯托公司；倒置顯微鏡，日本 Olympus 公司；紫外 可見分光光度計，北京萊伯泰科儀器有限責任公司；AR2130 型電子分析天平，上海梅特勒-托利多 有限公司；超低溫冰箱，美國 Thermo 公司；BXM50VD 型高壓滅菌鍋，上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有 限公司；流式細胞儀，美國 Beckman Coulter 公司； J-2 000 型高速分散勻質(zhì)器，常州丹瑞實驗儀器設備 有限公司；F3 型全自動熒光與可見光凝膠成像分析 系統(tǒng)，英國 Syngene 公司；Western Blot 蛋白顯影 儀，美國 Protein Simple 公司；低溫高速離心機，鹽 城凱特實驗儀器公司；生物組織自動包埋機，湖北 康龍電子科技有限責任公司；7500 型 RT-PCR 儀， 德國 Leica 公司。

2 結(jié)果

與空白對照組相比，LPS 組細胞遷移數(shù)量顯著增 加（P＜0.01）；與 LPS 組相比，姜黃素-20 組細胞遷 移數(shù)量顯著降低（P＜0.05）；姜黃素-40、姜黃素-80 組細胞遷移數(shù)量顯著降低（P＜0.01）。提示在一定的 濃度范圍內(nèi)，THP-1 細胞遷移量與姜黃素的給藥劑 量呈劑量依賴性降低趨勢。與空白對照組相比，LPS 組 細胞 HMGB1、MCP-1 蛋白表達水平均顯著升高（P＜ 0.01）；與 LPS 組相比，姜黃素-20 組細胞 HMGB1、 MCP-1 蛋白表達水平均顯著降低（P＜0.05）；姜黃 素-40、姜黃素-80 組細胞 HMGB1、MCP-1 蛋白表 達水平均顯著降低（P＜0.01）。提示 THP- 1 細胞HMGB1、MCP-1 蛋白表達與姜黃素的給藥劑量存在 一定負相關，即呈劑量依賴性降低趨勢。與空白對照組相比，LPS 組細胞 HMGB1、MCP-1 mRNA 表達水平均顯著升高 （P＜0.01）；與 LPS 組相比，姜黃素-10 組 MCP-1 mRNA 表達水平顯著降低（P＜0.05）；姜黃素-20 組 細胞 HMGB1 mRNA 表達水平顯著降低（P＜0.05）， MCP-1 mRNA 表達水平顯著降低（P＜0.01）；姜黃 素 - 40 組 、 姜 黃 素 - 80 組 細 胞 HMGB1、 MCP- 1 mRNA 表達水平均顯著降低（P＜0.01）。說明 THP-1 細胞 HMGB1、MCP-1 mRNA 表達水平與姜黃素的給 藥劑量存在一定負相關關系，即呈劑量依賴性降低 趨勢。與空白對照組相比，LPS 組細胞 AMPK、PPARα 蛋白表達水平均顯著降 低，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.01），STAT3 蛋白表達 水平顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.01）；與 LPS 組相比，姜黃素-10 組細胞 AMPK 蛋白表達水平 差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），PPARα 蛋白表達水 平顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），STAT3 蛋白表達水平顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）；姜黃素-20 組細胞 AMPK 蛋白表達水平差異 無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），PPARα 蛋白表達水平顯著 升高，差異具統(tǒng)計學意義（P < 0.05），STAT3 蛋白表 達水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）； 姜黃素-40、姜黃素-80 組細胞 AMPK、PPARα 蛋白 表達水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.01），STAT3 蛋白表達水平顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.01）；說明 THP-1 細胞 AMPK、PPARα 蛋白表達水平與姜黃素的給藥劑量存在一定正相 關，即呈劑量依賴性升高趨勢，而 STAT3 蛋白表達 水平與姜黃素的給藥劑量存在一定負相關，即呈劑 量依賴性降低趨勢。