新生兒 ABO 溶血病(ABO-HDN)是母體受到胎 兒紅細(xì)胞抗原刺激而產(chǎn)生IgG 類血型抗體,該抗體可 以通過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入胎兒的體內(nèi),致敏胎兒的紅細(xì) 胞,并被胎兒的單核巨噬系統(tǒng)處理,從而引起胎兒或 新生兒紅細(xì)胞被破壞而導(dǎo)致免疫性溶血。在我國(guó), 母嬰 ABO 血型系統(tǒng)不合占比較高。因此,孕婦產(chǎn)前 檢查IgG 血型抗體效價(jià),并分析其與新生兒溶血病 (HDN)的發(fā)病率關(guān)系,是早期預(yù)防及后期輔助診斷 ABO-HDN 的有效方法。本研究通過(guò)對(duì)入組的56 例 O 型 Rh(D)陽(yáng)性孕婦進(jìn)行產(chǎn)前IgG 血型抗體效價(jià) 檢測(cè),對(duì)其分娩后的新生兒進(jìn)行 ABO-HDN3項(xiàng)的檢 測(cè),探討孕婦產(chǎn)前IgG 血型抗體效價(jià)與 ABO-HDN 發(fā) 生率之間的關(guān)系,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
隨機(jī)選取本院婦產(chǎn)科門(mén)診產(chǎn)檢的56 例 O 型 Rh(D)陽(yáng)性孕婦,年齡22~36歲,中位年齡 32歲;孕期21~25周,中位孕期23周。納入標(biāo)準(zhǔn):本 院產(chǎn)科門(mén)診產(chǎn)檢,身體健康,孕 期 未 見(jiàn) 異 常 的 孕 婦。 排除標(biāo)準(zhǔn):產(chǎn)前不規(guī)則抗體陽(yáng)性、患有自身免疫性溶 血性疾病或其他原因?qū)е碌母鞣N溶血性疾病、有輸血 史等。孕婦均進(jìn)行第一次產(chǎn)前 ABO 血型抗體效價(jià)檢 測(cè),記錄相關(guān)參數(shù),包括孕婦 ABO 血型、IgG 血型抗 體效價(jià)、不規(guī)則抗體、血常規(guī)等。
1.2 試劑
ABO 反定型用紅細(xì)胞及抗 A、抗 B、抗 D 標(biāo)準(zhǔn)血清、不規(guī)則抗體檢測(cè)試劑、2-巰基乙醇(2-Me) 均為上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn);ABO 血 型卡、抗人球蛋白微柱凝膠檢測(cè)卡均為長(zhǎng)春博訊生物 技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。
1.3 方法
1.3.1 抗體效價(jià)檢測(cè)
采集孕婦產(chǎn)前靜脈血液標(biāo) 本,進(jìn)行血常規(guī)、ABO 血型、不規(guī)則抗體及IgG 血型 抗體效價(jià)檢測(cè)。血常規(guī)檢測(cè)采用 Sysmex-XN9000全 自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè);ABO 血型鑒定采用2次復(fù) 核方式,第1次用微柱凝膠卡法作正反定型確定孕婦 血型,第2次使用抗 A、抗 B、抗 D 標(biāo)準(zhǔn)血清及 ABO 反定型用紅細(xì)胞,采用試管法作正反定型復(fù)核孕婦血 型。不規(guī)則抗體試驗(yàn):采用博迅抗人球蛋白微柱凝膠 卡按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。孕婦產(chǎn)前IgG 血型抗體效 價(jià)試驗(yàn):采用抗人球蛋白微柱凝膠卡法按照2-Me試 劑說(shuō)明書(shū)操作,具體分3個(gè)步驟進(jìn)行試驗(yàn),第1步將 孕婦血清與2-Me按照1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、 1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024的比例在標(biāo) 記好的試管內(nèi)稀釋;第2步將稀釋液放置37 ℃恒溫水 浴箱15min進(jìn)行IgM 抗體裂解操作(裂解后溶液需 用 ABO 反定型用紅細(xì)胞溶液驗(yàn)證裂解是否完全,若未完全裂解需用0.9%氯化鈉溶液稀釋下一個(gè)比例重 新裂解,裂解后重復(fù)第2個(gè)步驟);第3步用裂解后溶 液與0.8%的 A 型或B型反定型用紅細(xì)胞溶液按照1 ∶1比例加入抗人球蛋白微柱凝膠卡中進(jìn)行孕婦產(chǎn)前 抗體效價(jià)檢測(cè)。
1.3.2 ABO-HDN3項(xiàng)檢測(cè)
用微柱凝膠卡法對(duì)新 生兒血型及 ABO-HDN3項(xiàng)檢測(cè),其中包括間接抗人 球蛋白試驗(yàn)(IAT)、直接抗人球蛋白試驗(yàn)(DAT)、抗 體釋放試驗(yàn)。IAT 及 DAT 兩項(xiàng)試驗(yàn)按照抗人球蛋 白卡試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作;抗體釋放試驗(yàn)分 3 個(gè)步 驟:第1步用生理鹽水洗滌壓積紅細(xì)胞3~5次(洗滌 末次吸出上清液,作抗體釋放試驗(yàn)的陰性對(duì)照,以驗(yàn) 證洗滌是否充分);第2步加入等體積的生理鹽水充 分混勻后置56 ℃水浴箱10min;第3步離心后取出 上清液(即放散液)加入抗人球卡并加入洗滌末次的 上清液作為陰性對(duì)照,進(jìn)行抗體檢測(cè)。
1.4 結(jié)果判斷
ABO-HDN 的診斷包括以下幾點(diǎn): 母嬰血型不同、DAT、IAT 和抗體釋放試驗(yàn)的結(jié)果。 以抗體釋放試驗(yàn)陽(yáng)性為診斷標(biāo)準(zhǔn),結(jié)合新生兒血紅蛋 白、膽 紅 素 水 平 等 臨 床 數(shù) 據(jù) 及 其 臨 床 癥 狀 來(lái) 診 斷 ABO-HDN。見(jiàn)表1。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用 SPSS20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行 分析。計(jì)數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)表示,組間比較采用χ 2 檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié) 果
結(jié)果顯示,56例 O 型 Rh(D)陽(yáng)性孕婦產(chǎn)前抗體效價(jià)以低效價(jià)為主, 90.7%的孕婦抗體效價(jià)在1∶256以下,其中,50.0% 的孕婦抗體效價(jià)≤1∶64,抗體效價(jià)<1∶64的患者占 25.9%,抗體效價(jià)為1∶64的患者占24.1%??贵w效 價(jià)為1∶128的患者占18.5%,抗體效價(jià)為1∶256的 患者 占 22.2%,抗 體 效 價(jià) ≥1∶512 僅 占 總 數(shù) 的 9.3%。以孕婦產(chǎn)前IgG 血型抗體效價(jià)1∶64作為界值, 將入組的孕婦按照參考值分為兩組。結(jié)果顯示,產(chǎn)前 IgG 血型抗體效價(jià)≥1∶64組 ABO-HDN 陽(yáng)性檢出 率高于產(chǎn)前效價(jià)<1∶64組(P=0.02)。產(chǎn)前抗體效 價(jià)<1∶64、1∶64、1∶128、1∶256、≥1∶512 的 ABO-HDN 檢 出 率 分 別 為56.3%、69.2%、90.0%、 91.7%、100.0%。對(duì)56例新 生兒按 ABO 血型進(jìn)行分組,A 型新生兒 ABO-HDN 陽(yáng)性率為72.7%,B型 ABO-HDN 陽(yáng)性率為79.4%, B型新生兒 ABO-HDN 陽(yáng)性率高于 A 型,但差異無(wú)統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義(P=0.56)。進(jìn)一步研究分析發(fā)現(xiàn),在IgG 血型抗體 <1∶64 和 1∶64 的孕婦中,B 型 新 生 兒 ABO-HDN 檢出率高于 A 型,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05);在IgG 血型抗體1∶128和1∶256孕婦 中,A 型新生兒 ABO-HDN 檢出率則高于 B 型,差異 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。IgG 血型抗體≥1∶512的 孕婦中,A 型新生兒與B型新生兒 ABO-HDN 檢出率 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
3 討 論
上海博迅通過(guò)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)孕婦產(chǎn)前IgG 血型抗體效價(jià)水平對(duì)預(yù) 防 ABO-HDN 發(fā)生有著重要意義。胎兒紅細(xì)胞抗 原免疫母體產(chǎn)生的IgG 血型抗體能通過(guò)胎盤(pán)屏障與 胎兒的紅細(xì)胞血型抗原相結(jié)合,分娩后,容易引起新生兒發(fā)生肝脾腫大、膽紅素腦病甚至死亡等溶血病特 征,嚴(yán)重威脅新生兒的健康乃至生命安全。因此, 對(duì)孕婦進(jìn)行產(chǎn)前IgG 血型抗體效價(jià)檢測(cè),可以判斷孕 婦血中是否存在IgG 類血型抗體,從而有效地預(yù)防 ABO-HDN。 本次研究通過(guò)對(duì)入組的56例 O 型 Rh(D)陽(yáng)性的 孕婦進(jìn)行產(chǎn)前IgG 血型抗體效價(jià)檢測(cè),并對(duì)孕婦分娩 后的新生兒進(jìn)行 DAT、IAT 及抗體釋放試驗(yàn)的檢測(cè), 通過(guò)收集孕婦產(chǎn)前血型抗體效價(jià)結(jié)果及 ABO-HDN3 項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果來(lái)判斷 ABO-HDN 的發(fā)生情況,研究結(jié)果 顯示,50.0%的孕婦產(chǎn)前抗體效價(jià)≤1∶64,這提示在 日常檢測(cè)中應(yīng)該注意預(yù)防漏檢低效價(jià)的樣本。由此 可見(jiàn),設(shè)定孕婦產(chǎn)前抗體參考值,對(duì)預(yù)測(cè) ABO-HDN 的價(jià)值意義重大。