大鼠深靜脈血栓預(yù)防作用分析-滅菌器的使用?。?/h1>

來(lái)源：未知 發(fā)布日期：2019-10-08 11:34【大 中 小】

深靜脈血栓( deep vein thrombosis，DVT) 好發(fā)于下肢，常 繼發(fā)于手術(shù)、分娩、腫瘤等危險(xiǎn)因素，尤其在骨科大手術(shù)后， 其發(fā)病率每年不斷上升。中醫(yī)藥在預(yù)防深靜脈血栓發(fā)揮 著重要作用。本實(shí)驗(yàn)研究血府逐瘀湯對(duì)深靜脈血栓大 鼠模型血栓濕重的影響及血漿組織型纖溶酶原激活劑( t － PA) 、組織型纖溶酶原激活劑抑制物( PAI) 的影響。現(xiàn)將實(shí) 驗(yàn)方法與結(jié)果報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1. 1 動(dòng)物

SPF 級(jí) SD 雄性大鼠，50 只，體質(zhì)量( 265. 83 ± 19. 53) g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物 合格證號(hào): 43004700012066。

1. 2 藥物

血府逐瘀湯藥物組成符合《方劑學(xué)》中要求 ( 由桃仁 12g、紅花 9g、當(dāng)歸 9g、生地黃 9g、川芎 4. 5g、赤芍 6g、牛膝 9g、柴胡 3g、桔梗 4. 5g、枳殼 6g、甘草 6g 組成) ，由湖 南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科提供道地藥材并煎制。 制備方法: 蒸餾水浸泡 1h，煮沸 30min 后過(guò)濾取液，再加水 殘?jiān)蠓?，如此反?fù)操作 2 次，合并 2 次濾液，濃縮至每毫升 含生藥 0. 684g，熬制完畢，將中藥放于立式壓力蒸汽滅菌器(上海博迅BXM-30R)里滅菌，放入 4℃冰箱冷藏備用。低分子肝素鈉: 4000IU/支 ( Laboratoire AVENTIS，批號(hào): H20030601 － 605) 。

1. 3 儀器及試劑

JY3002 型電子天平( 上海精密科學(xué)儀器有限公司) ; Elisa 試劑盒。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2. 1 動(dòng)物分組及給藥

將 50 只雄性 SD 大鼠隨機(jī)分成4 組， 血府逐瘀湯組( n = 13) : 灌胃血府逐瘀湯生藥 6. 84g /( kg·d) ; 低分子肝素鈉組( n = 13) : 每日肌內(nèi)注射低分子肝素鈉， 600IU/( kg·d) ; 模型對(duì)照組( n = 13) : 灌胃用 0. 9% 氯化鈉 注射液 10ml /( kg·d) ; 假手術(shù)組( n = 11) : 灌胃用 0. 9% 氯 化鈉注射液 10ml /( kg·d) 。每組均給藥 7d。

2. 2 模型制備

給藥結(jié)束后對(duì)除假手術(shù)組外的其余 3 組參 照溫定文等方法建立深靜脈血栓動(dòng)物模型。腹腔注射 1% 戊巴比妥鈉( 0. 1ml /20g) 麻醉大鼠后固定，腹部消毒后 沿其腹白線逐層打開(kāi)腹腔，切口不能太大，下至凝固腺，上 至露出肝臟一角即可。將腹腔內(nèi)小腸等器官拖出放置于大 鼠左側(cè)，暴露出下腔靜脈，動(dòng)作要輕柔，避免損傷器官，拖出 的器官用浸潤(rùn)過(guò) 0. 9% 氯化鈉注射液的紗布包裹，防止長(zhǎng)期 置于空氣中造成脫水。移至體視顯微鏡下，鈍性分離血管 周圍結(jié)締組織，暴露下腔靜脈及其分支，在腎靜脈下方將腹 主動(dòng)脈和下腔靜脈剝離開(kāi)，然后用 7 /0 縫合線將下腔靜脈結(jié) 扎，之后逐個(gè)將其分支結(jié)扎。按解剖位置將腸道等器官放 回腹腔，在腹腔中加入 1% 氨芐溶液 0. 2ml，防止感染。用 5 /0 縫合線逐層縫合腹腔，術(shù)后置于 25℃ ～ 28℃ 的環(huán)境中， 直至大鼠復(fù)蘇，即可正常飼養(yǎng)。假手術(shù)組除不結(jié)扎下腔靜 脈及其分支外，其他操作同造模組。

2. 3 觀察指標(biāo)

造模術(shù)后 72h 每組隨機(jī)取 5 只大鼠脫臼處 死，剖開(kāi)腹部，移開(kāi)小腸等器官，及時(shí)股動(dòng)脈放血，分離血 漿，Elisa 試劑盒檢測(cè) t － PA、PAI 水平; 暴露大鼠下腔靜脈， 置于體視顯微鏡下，截取下腔靜脈及分支靜脈結(jié)扎段，電子 天平稱取血栓濕重。 各組剩余大鼠于造模術(shù)后第 10 天脫臼處死，剖開(kāi)腹部， 移開(kāi)小腸等器官，及時(shí)股動(dòng)脈放血，分離血漿，Elisa 試劑盒 檢測(cè) t － PA、PAI 水平，并檢測(cè)其凝血常規(guī)及抗凝血酶Ⅲ 水平。

2. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用 SPSS 21. 0 統(tǒng)計(jì)軟件包處 理。計(jì)量數(shù)據(jù)描述均采用均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差( x ± s) 表示，經(jīng)正 態(tài)性檢驗(yàn)( kolomogorov － smirnov 法) ，方差齊性檢驗(yàn)后，若滿 足條件，組間差異采用多個(gè)樣本兩兩比較方差分析檢驗(yàn) ( LSD 法) 。若不滿足條件，組間差異采用多個(gè)樣本兩兩比 較秩和檢驗(yàn)。P ＜ 0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

本組大鼠造模前無(wú)死亡，均造模成功，造模術(shù)后 2 只 ( 模型對(duì)照組和低分子肝素鈉組各 1 只) 死亡，死亡原因?yàn)?肺栓塞 1 只和腹腔內(nèi)出血 1 只。

3. 1 血栓濕重

與假手術(shù)組相比，模型對(duì)照組濕重較重，差 異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 與模型對(duì)照組相比，低分子肝素鈉組、血 府逐瘀湯組血栓濕重較輕，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 血府逐瘀 湯組和低分子肝素鈉組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 血府逐瘀 湯組和低分子肝素鈉組的抑制率均大于 30% ，提示有良好 的預(yù)防血栓形成的作用。( 見(jiàn)表 1)

3. 2 血漿

t － PA 和 PAI 水平 1) 血漿 t － PA。2 個(gè)時(shí)段組 內(nèi)比較: 模型對(duì)照組與假手術(shù)組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 與模型對(duì)照組相比，低分子肝素鈉組、血府逐瘀湯組血漿 t － PA含量較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 血府逐瘀湯組和低分 子肝素鈉組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組內(nèi) 2 個(gè)時(shí)段之間比 較: 同組術(shù)后 72h 與 10d 之間無(wú)明顯差異。說(shuō)明低分子肝素 鈉組和血府逐瘀湯組有良好的促進(jìn)血漿 t － PA 生成的作用， 但是對(duì)造模術(shù)后 72h 與 10d 之間的促進(jìn)效果差別不大。 2) 血漿 PAI。2 個(gè)時(shí)段組內(nèi)比較: 模型對(duì)照組與假手術(shù)組相 比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 與模型對(duì)照組相比，低分子肝素鈉 組、血府逐瘀湯組血漿 PAI 含量較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 血府逐瘀湯組和低分子肝素鈉組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 組內(nèi) 2 個(gè)時(shí)段之間比較: 同組術(shù)后 72h 與 10d 之間無(wú)明顯差 異。說(shuō)明血府逐瘀湯組和低分子肝素鈉組有良好的抑制血 漿 PAI 生成的作用，但是對(duì)造模術(shù)后 72h 與 10d 之間的抑制 效果差別不大。

4 討 論

血栓的形成是一個(gè)復(fù)雜過(guò)程，與血流動(dòng)力學(xué)、血管壁、 血小板、凝血與纖溶活性等諸多因素有關(guān)。正常情況下，凝 血系統(tǒng)和抗凝系統(tǒng)處于動(dòng)態(tài)平衡，如果凝血系統(tǒng)被激活，且 占優(yōu)勢(shì)時(shí)，則出現(xiàn)血栓性疾病。血府逐瘀湯作為深靜脈 血栓防治的重要代表方之一，具有活血化瘀、行氣止血功 效。本實(shí)驗(yàn)從預(yù)防深靜脈血栓理念出發(fā)，對(duì) SD 大鼠造模前 預(yù)防性服用血府逐瘀湯或低分子肝素鈉，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在 血栓造模術(shù)后 72h 血府逐瘀湯組及低分子肝素鈉組血栓濕 重與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血府逐瘀湯組及低分 子肝素鈉組血栓濕重?zé)o差異，說(shuō)明術(shù)前進(jìn)行血栓防治干預(yù) 能夠有效減輕血栓的形成且血府逐瘀湯與低分子肝素鈉作 用無(wú)差異。t － PA 和 PAI 對(duì)機(jī)體纖溶系統(tǒng)活性起到重要的 調(diào)節(jié)作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，血府逐瘀湯組及低分子肝素 鈉組促進(jìn) t － PA 與抑制 PAI 生成均優(yōu)于模型組，且在術(shù)后 72h 與術(shù)后 10d 2 個(gè)時(shí)段作用效果無(wú)明顯差異，說(shuō)明術(shù)前進(jìn) 行血栓防治干預(yù)能夠有效促進(jìn) t － PA 與抑制 PAI 生成，且作 用效果可持續(xù)一定時(shí)間。通過(guò)檢測(cè)造模后大鼠凝血相關(guān)指 標(biāo)，發(fā)現(xiàn)其能夠刺激抗 AT － Ⅲ，縮短凝血時(shí)間。

下一篇：醬油的風(fēng)味物質(zhì)形成分析-博訊恒溫水浴鍋的使用 上一篇：IgG血型抗體效價(jià)預(yù)測(cè)分析?。?！