貴州省是全國(guó)四大中藥產(chǎn)區(qū)之一，醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)也是其特 色優(yōu)勢(shì)項(xiàng)目，故保證微生物限度檢查方法的完整性與可 靠性，是保障當(dāng)?shù)厮幤钒踩闹匾M成部分。同名異型中 成藥是指名稱相同、劑型不同的中成藥，貴州省食品藥 品檢驗(yàn)所近年來相關(guān)研究涉及到 7 組該類型，有的是同一 藥企產(chǎn)品，有的為不同藥企生產(chǎn)。包擴(kuò)獨(dú)家品種民族藥、 醫(yī)院制劑，劑型涉及到丸劑、膠囊、片劑、顆粒劑、洗劑、 搽劑?，F(xiàn)就上述藥品微生物限度檢查方法適用性研究過程 及結(jié)果進(jìn)行分析。

1 材料

1. 1 樣品

7 組樣品共涉及 8 家生產(chǎn)企業(yè)，具體如下。 第 1 組: 日 舒 安 濕 巾 ( 批 號(hào) 5076001、5076002、 5076003 ) 、 日 舒 安 洗 液 ( 批 號(hào) 4066049、 4066080、 4066110) ，貴州漢方藥業(yè)有限公司。 第 2 組: 婦 科 再 造 膠 囊 ( 批 號(hào) 1512003、2026008、 2026012) ，貴州漢方藥業(yè)有限公司; 婦 科 再 造 丸 ( 批 號(hào) 11717053、11717054、11717062) ，貴州德昌祥藥業(yè)有限公司。 第 3 組: 六味地黃膠囊 ( 批號(hào) 20170102、20170103、 20170104) ，貴州圣濟(jì)堂制藥有限公司; 六味地黃丸 ( 批號(hào) DCXA0401、DCXA0421、DCXA0532) ，貴州德昌祥藥業(yè)有 限公司。 第 4 組: 糖寧通絡(luò)膠囊 ( 批號(hào) 20170601、20170901、 20171001) 、 糖 寧 通 絡(luò) 片 ( 批 號(hào) 20160401、20161201、 20170901) ，貴州百靈企業(yè)集團(tuán)制藥股份有限公司。 第 5 組: 復(fù)方天麻顆粒 ( 批號(hào) 20170914、20170406、 20170710) ，貴州科輝制藥有限責(zé)任公司; 復(fù)方天麻片 ( 批 號(hào) 20161003、20170301、20170702) ，貴州百靈企業(yè)集團(tuán)制 藥股份有限公司。 第 6 組: 枇 杷 止 咳 顆 粒 ( 批 號(hào) 180313、180314、180315) 、枇杷止咳膠囊 ( 批號(hào) 180402、180403、180404) ， 貴州神奇藥業(yè)有限公司。 第 7 組: 護(hù) 肝 寧 片 ( 批 號(hào) 20180104、 20180201、 20180203) ，貴州信邦制藥股份有限公司; 護(hù)肝寧膠囊 ( 批 號(hào) 20160385、20180386、20160387) ，貴州益佰制藥股份有 限公司。 其中，第 1、2 組為獨(dú)家品種，第 4 組為醫(yī)院制劑。

1. 2 菌種

黑曲霉 ［CMCC ( F) 98003］、枯草芽孢桿菌 ［CMCC ( B) 63501］、白色念珠菌 ［CMCC ( F) 98001］、 金黃色 葡 萄 球 菌 ［CMCC ( B) 26003］、銅 綠 假 單 胞 菌 ［CMCC ( B) 10104］、生孢梭菌 ［CMCC ( B) 64941］、大 腸埃 希 菌 ［CMCC ( B) 44102］、乙 型 副 傷 寒 沙 門 菌 ［CMCC ( B) 50094］，均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。

1. 3 試劑與培養(yǎng)基

吐溫-80 ( 成都金山化學(xué)試劑，批號(hào) 20170606) 。梭菌增菌培養(yǎng)基 ( 批號(hào) 17070161) 、哥倫比亞 瓊脂培養(yǎng)基 ( 批號(hào) 1707171) 、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 TSB ( 批號(hào) 18030965) 、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 TSA ( 批 號(hào) 18042762 ) 、 紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 ( 批 號(hào) 17061281) 、溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) ( 批號(hào) 1512232) 、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 SDA ( 批號(hào) 18010864) 、 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 SDB ( 批號(hào) 18073161) 、腸道增菌 培養(yǎng)基 ( 批號(hào) 1609072) 、甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基 ( 批號(hào) 1610083) 、麥康凱液體培養(yǎng)基 ( 批號(hào) 1703139) 、麥康凱瓊 脂培養(yǎng)基 ( 批號(hào) 1604055) 、木糖賴氨酸脫氧膽酸瓊脂 ( 批 號(hào) 17050483) ，均購(gòu)于北京陸橋技術(shù)股份有限公司; ＲV 沙 門菌增菌液體培養(yǎng)基 ( 批號(hào) 3303081) ，購(gòu)于廣東環(huán)凱微生 物科技有限公司。

1. 4 儀器

生物安全柜 ( 美國(guó) NuAire 實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司，型 號(hào) NU-425-400E) ; 低溫恒溫培養(yǎng)箱 ( 型號(hào) KB240) 、電熱恒溫培養(yǎng)箱 ( 型號(hào) BF240) ( 德國(guó)賓德公司) ; 博迅BXM-30R立式壓力蒸汽滅菌器［上海博迅提供］; 電子天平 ( 梅特勒－托利多國(guó)際有限公司，型 號(hào) ME2002) 。

2 方法與結(jié)果

2. 1 供試液制備

按 2015 年版 《中國(guó)藥典》四部通則 1105要求進(jìn)行制備。其中，日舒安洗液、咳速停糖漿取 樣量為 10 mL，日舒安濕巾取樣量為 100 cm2 ，其余品種取 樣量為 10 g，分別加 TSB 至 100 mL，制成 1 ∶ 10 供試液， 再據(jù)品種實(shí)際情況選擇合適稀釋倍數(shù)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。

2. 2 菌 液 制 備

按 2015 年 版 《中 國(guó) 藥 典》 四 部 通 則 1105、1106要求進(jìn)行制備。

2. 3 回收比值計(jì)算

計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)中，回收比值 = ( 試驗(yàn)組菌落數(shù)－供試品對(duì)照組菌落數(shù)) /菌液對(duì)照組菌落數(shù)，添加中和劑組的中和劑回收比值 = ( 中和劑對(duì)照組 菌落數(shù)－供試品對(duì)照組菌落數(shù)) /菌液對(duì)照組菌落數(shù)。2015 年版 《中國(guó)藥典》 規(guī)定，回收比值應(yīng)在 0. 5 ～ 2 之 間，本實(shí)驗(yàn)將其下限提升至 0. 7 左右，以保證該方法在之 后日常檢驗(yàn)中重復(fù)性更佳。

2. 4 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)

2. 4. 1 分組

試驗(yàn)組，按要求在供試液加入 “2. 2”項(xiàng)下 菌液，使每 1 mL 供試液中的加菌量不大于 100 cfu，混勻; 供試品對(duì)照組，取供試液，以 TSB 代替菌液，其他同試驗(yàn) 組; 菌液對(duì)照組，取 TSB 替代供試液，其他同試驗(yàn)組; 中 和劑對(duì)照組，取含 1%吐溫－80 的 TSB 代替供試液，其他同 試驗(yàn)組。以上 4 組均取 1 mL 混合液，置于 90 mm 培養(yǎng)皿 中，需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)對(duì)應(yīng)組加入 20 mL TSA 培養(yǎng)基，霉菌、 酵母菌計(jì)數(shù)對(duì)應(yīng)組加入 20 mL SDA 培養(yǎng)基，分別放至 34、 23 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 3、5 d，計(jì)數(shù)記錄。

2. 4. 2 預(yù)試驗(yàn)

據(jù)藥品品種成分及企業(yè)反饋信息，分 別在合適稀釋倍數(shù)下選擇各品種對(duì)應(yīng)的敏感菌株進(jìn)行預(yù)試 驗(yàn)，結(jié)果見表 1。

3 討論

方法適用性試驗(yàn)的本質(zhì)是建立對(duì)樣品影響更小、操作 得率更高的方法，但其本身工作量大，而且存在不同實(shí) 驗(yàn)室方法欠佳、重復(fù)勞動(dòng)過多的問題，去除藥品抑菌性 是其中的重點(diǎn)和難點(diǎn)。因此，本實(shí)驗(yàn)在研究前對(duì)樣品組 分抑菌性進(jìn)行分析以確定預(yù)試驗(yàn)菌株，再根據(jù)藥典對(duì)不同 給藥途徑的限度規(guī)定，確定最終的計(jì)數(shù)方法; 對(duì)控制菌檢 查法，主要結(jié)合給藥途徑、是否含藥材原粉 2 個(gè)方面來開展研究，能有效提高方法適用性試驗(yàn)的效率。