火龍果，屬仙人掌科量天尺屬和蛇鞭柱屬植物，北方地區(qū)主要采用日光溫室進(jìn)行種植。本研究上海博訊醫(yī)療生物儀器股份有限公司以成熟期紅肉火龍果為試材，通過(guò)改良CTAB法進(jìn)行總DNA提取，旨在探求紅肉火龍果果肉、果皮及種子中DNA的含量情況，為進(jìn)一步從分子遺傳學(xué)角度進(jìn)行紅肉火龍果各類型遺傳背景研究提供依據(jù)。
儀器
高速離心機(jī)（德國(guó)EPPendorf）、移液槍（德國(guó)EPPendorf）、紫外分光光度計(jì) （德國(guó)EPPendorfBiophotometer）、凝膠成像系統(tǒng)（北京六一）、恒溫水浴鍋（上海博訊）、電泳儀（北京六一）、電泳槽（北京六一）等。
上海博迅HH.S21-6電熱恒溫水浴鍋
1 紅肉火龍果果實(shí)不同部位DNA質(zhì)量濃度不同
通過(guò)改良CTAB法對(duì)紅肉火龍果果肉、果皮、種子部位進(jìn)行DNA提取，結(jié)果表明成熟期紅肉火龍果果肉、果皮、種子均可有效提取DNA，但提取的DNA質(zhì)量濃度略有差異，如從種子中提取的DNA質(zhì)量濃度0.135μg·ml-1，果皮中提取的DNA質(zhì)量濃度0.078μg·ml-1，果肉中提取的DNA質(zhì)量濃度0.036μg·ml-1，種 子 中DNA質(zhì)量濃度大約是果皮中DNA質(zhì)量濃度的1.73倍，果肉中DNA質(zhì)量濃度的3.75倍；果皮中DNA質(zhì)量濃度是果肉中DNA質(zhì)量濃度的2.17倍。
2 改良CTAB法去除雜質(zhì)效果好
成熟期紅肉火龍果果實(shí)中含有較多的糖類、蛋白質(zhì)、酚類等次生物質(zhì)，嚴(yán)重影響DNA的提取質(zhì)量和純度。上海博訊試驗(yàn)結(jié)果表明：通過(guò)改良CTAB法提取的紅肉火龍果果肉、果皮、種子中的DNA濃度均超過(guò)０．０３０μg·ml-1，說(shuō)明提取物中糖、蛋白質(zhì)、多酚、酶等干擾物質(zhì)去除較好，能夠?yàn)檫M(jìn)一步研究提供高質(zhì)量的DNA。
3 研磨及裂解時(shí)間非常關(guān)鍵
為了能夠獲得高質(zhì)量的DNA，紅肉火龍果果肉、果皮、種子在研磨時(shí)應(yīng)加入充足的液氮，并迅速研磨，使果肉、果皮呈粉色粉末，種子成白色粉末，研磨好后迅速轉(zhuǎn)移至離心管中，迅速加入CTAB緩沖液，充分搖勻，在65℃ 水浴中反應(yīng)60min，進(jìn)行裂解。裂解時(shí)間短，DNA釋放不完全，時(shí)間長(zhǎng)DNA降解嚴(yán)重，因此，破壁好壞及細(xì)胞裂解時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)于DNA的得率至關(guān)重要。
以上內(nèi)容僅供參考。
