感染性腹瀉是一組由細(xì)菌、病毒和原蟲等多種腸 道病原體感染引起的，以腹瀉癥狀為主的腸道傳染病， 廣泛流行于世界各地，由于該病發(fā)病率高、流行極其廣 泛，已成為全球尤其是發(fā)展中國家的重要公共衛(wèi)生問題。細(xì)菌性腹瀉在感染性腹瀉中所占比例較高，其 常見病原菌有沙門菌、腸致瀉性大腸埃希菌( diarrheagenic Escherichia coli，DEC) 、弧菌、志賀菌、氣單胞菌、 空腸彎曲菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌、金黃色葡萄球菌、艱 難梭菌、蠟樣芽胞桿菌、克羅諾桿菌、單增李斯特菌等。腹瀉病人糞便標(biāo)本中病原菌的分布各地不同， 主要取決于當(dāng)?shù)氐闹虏【V、主要流行菌株和當(dāng)?shù)厝?群的免疫狀況等，北京地區(qū)沙門菌、DEC 和副溶血性 弧菌檢出率較高。

1 材料與方法

1. 1 標(biāo)本來源

本轄區(qū)哨點(diǎn)醫(yī)院腸道門診 2017 年 5 月－2018 年 4 月感染性腹瀉患者的 380 份( 1－3、11－ 12 月各 20 份，其他月份各 40 份) 糞便標(biāo)本，患者的選 入標(biāo)準(zhǔn)為: 每日排便≥3 次，大便性狀改變( 呈稀便、水樣便、黏膿便或膿血便等) ，且均未服用抗生素。用無 菌棉簽采集標(biāo)本后，保存于 Cary－Blair 運(yùn)送培養(yǎng)基，按 生物安全要求于采樣當(dāng)天送至監(jiān)測實(shí)驗(yàn)室。

1. 2 試劑與儀器

XLD 培養(yǎng)基、血平板、CCI 培養(yǎng)基 和 EC 肉湯( 英國 OXOID) ; 大腸桿菌、沙門菌和弧菌顯 色培養(yǎng)基( 法國科馬嘉) ; ＲS 和 CN 培養(yǎng)基( 北京陸 橋) ; 空腸彎曲菌雙孔濾膜法培養(yǎng)檢測試劑盒( 青島中 創(chuàng)) ; SBG 增菌液和 3% NaCl 堿性蛋白胨水( 友康恒業(yè) 生物科技) ; Genbag 微需氧產(chǎn)氣袋和 VITEK GN/GP 鑒定卡( 法國生物梅里埃) ; 志賀菌診斷血清和副溶血 弧菌診斷血清( 日本 Denka Seiken) 、沙門菌診斷血清 ( 丹麥 SSI) 、生物安全柜(上海博迅) 、恒溫培養(yǎng)箱( 日 本 SANYO) 、全自動細(xì)菌鑒定儀 VITEK 2 和濁度儀( 法 國生物梅里埃) ，Premix Ex TaqTM( Probe qPCＲ) 購自 大連寶生物公司; 7 對特異性基因( eae、stx1、stx2、lt、 st、ipaH、aggr) 引物及探針由北京市疾病預(yù)防控制中 心提供。

1. 3 病原菌檢測方法

沙門菌、DEC、副溶血性弧菌 和志賀菌的分離、生化鑒定及血清學(xué)分型按照《感染 性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn) WS271－2007》和《細(xì)菌性和阿米巴性 痢疾診斷標(biāo)準(zhǔn) WS287－2008》; 氣單胞菌用 ＲS 平板進(jìn) 行選擇性分離( 37 ℃，18 ～ 24 h) ，可疑菌落為黃色; 銅 綠假單胞菌用 CN 平板進(jìn)行選擇性分離( 37 ℃，18 ～ 24 h) ，可疑菌落為藍(lán)/綠色菌落、產(chǎn)熒光的非藍(lán)/綠色菌落和紅褐色菌落; 金黃色葡萄球菌用 7. 5%氯化鈉 肉湯進(jìn)行增菌( 37 ℃，18～24 h) ，之后用血平板進(jìn)行選 擇性分離( 37 ℃，18～24 h) ，可疑菌落較大、圓形、光滑 凸起、濕潤、金黃色( 有時為白色) 、周圍可見完全透明 溶血圈; 克羅諾桿菌用 MLST －Vm 肉湯( 44 ℃，18 ～ 24 h) 進(jìn) 行 增 菌，之 后 用 CCI 平板進(jìn)行選擇性分離 ( 37 ℃，18 ～ 24 h) ，可疑菌落為藍(lán)綠色; 空腸彎曲菌的 分離鑒定詳見空腸彎曲菌雙孔濾膜法培養(yǎng)檢測試劑盒 說明書。用全自動細(xì)菌鑒定儀 VITEK 2 對所有可疑菌 進(jìn)行生化鑒定，診斷血清進(jìn)行血清學(xué)分群，PCＲ 進(jìn)行 DEC 特異性基因的分析，其中腸致病性大腸埃希菌 ( enteropathogenic Escherichia coli，EPEC) : eae 陽性; 腸 出血性大腸埃希菌( enterohemorrhagic Escherichia coli， EHEC) : eae、stx1 和 stx2 陽性，或 eae 和 stx1 陽性，或 eae 和 stx2 陽性; 腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌( enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC) : lt 和 st 陽性，或 lt 陽性，或 st 陽性; 腸侵襲性大腸埃希菌( enteroinvasive Escherichia coli，EIEC) : ipaH 陽性; 腸集聚性大腸埃希菌( enteroaggregative Escherichia coli，EAEC) : aggＲ 陽性。

1. 4 數(shù)據(jù)分析

采用 SPSS 20. 0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分 析，計數(shù)資料使用 χ2 檢驗(yàn)，P＜ 0. 05 為差異有統(tǒng)計學(xué) 意義。

2 結(jié) 果

在 380 份感染性腹瀉患者糞 便標(biāo)本中，檢出病原菌 189 株，檢出率為 49. 74%，其中 29 份糞便標(biāo)本中檢出≥2 種病原菌。除常規(guī)監(jiān)測工作 中主要監(jiān)測的 DEC( 構(gòu)成比 13. 76%) 、副溶血性弧菌 ( 構(gòu)成比 10. 58%) 、沙門菌( 構(gòu)成比 10. 05%) 和志賀菌 ( 構(gòu)成比 0. 53%) 外，還檢出金黃色葡萄球菌、氣單胞 菌、克羅諾桿菌、空腸彎曲菌、河弧菌、非 O1 /O139 群 霍亂弧菌等 6 種腹瀉相關(guān)病原菌和肺炎克雷伯菌、產(chǎn) 酸克雷伯菌、銅綠假單胞菌等 3 種機(jī)會致病菌。在 189 株病原菌中檢出率最高的是肺炎克雷伯菌( 構(gòu)成 比 19. 05%) ，其次為金黃色葡萄球菌 ( 構(gòu) 成 比 17. 99%) 。同一菌屬中的進(jìn)一步分群發(fā)現(xiàn)，沙門菌中 主要為腸炎沙門菌( 占 36. 84%，7 /19) ，DEC 中 EPEC ( 占 42. 31%，11 /26) 和 ETEC( 占 38. 46%，10 /26) 檢出 較多，副溶血性弧菌的主要血清型為 O3: K6 ( 占 69. 57%，16 /23 ) ，氣單胞菌以溫和氣單胞菌 ( 占 76. 47%，13 /17) 為主，克雷伯菌中主要為肺炎克雷伯 菌( 占 94. 74%，36 /38) 。

3 討 論

細(xì)菌性腹瀉是全球性的公共衛(wèi)生問題，引起細(xì)菌 性腹瀉的病原菌種類多，且各地腹瀉病人糞便標(biāo)本病 原菌檢出情況不一。本研究結(jié)果顯示，北京市昌 平區(qū)腹瀉患者糞便標(biāo)本中機(jī)會致病菌肺炎克雷伯菌檢 出率最高，其次為金黃色葡萄球菌，之后才是常規(guī)監(jiān)測 ( 沙門菌、副溶血性弧菌、霍亂弧菌、志賀菌、DEC、彎曲 菌和小腸結(jié)腸耶爾森菌) 中的 DEC、副溶血性弧菌和沙 門菌，其他 5 種病原菌( 氣單胞菌、空腸彎曲菌、志賀 菌、克羅諾桿菌、銅綠假單胞菌) 也有檢出。