１ 材料與方法

Ｌａｍｂｄａ ３６５ 紫外／ 可見分光光度計(jì)和 ＬＳ ５５ 熒光 光譜儀， 美國(guó) Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ 公司； ＺＷＹ?２４０ 恒溫?fù)u 床， 上海智誠(chéng)分析儀器制造有限公司；ＭＩＫＲＯ ２００Ｒ 高速離心機(jī)， 德國(guó) Ｈｅｔｔｉｃｈ 公司；ＢＧ?ｖｅｒＭＩＤＩ 蛋白質(zhì) 電泳儀，北京百晶生物技術(shù)有限公司；Ｓｉｇｍａ ３?１８ＫＳ 冷 凍 離 心 機(jī)， 德 國(guó) Ｓｉｇｍａ 離 心 機(jī) 有 限 公 司； ＧｅｎｏＳｅｎｓ１８５０ 凝膠成像儀， 上海勤翔科學(xué)儀器有限 公司；博迅BXM-30R立式壓力蒸汽滅菌器，上海博迅醫(yī)療 生物儀器股份有限公司。

２ 結(jié)果與分析

在大腸桿菌胞內(nèi)合成藻藍(lán)蛋白的過程中，最佳溫度 常設(shè)定在 １８ ℃左右 。 本研究中，首先參照胞內(nèi)合成 的條件，在１６ ℃的條件下加入 １ ｍｍｏｌ／ Ｌ 的 ＩＰＴＧ 表達(dá) ＣｐｃＢ 直到６０ ｈ，胞外培養(yǎng)基中沒有檢測(cè) 到任何 ＣｐｃＢ 熒光；在沒有 ＩＰＴＧ 的條件下，也沒有檢測(cè)到熒光。 低溫下胞內(nèi)合成的藻藍(lán)蛋白不 向胞外分泌，這可能與低溫抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)率和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋 白的表達(dá)有關(guān) 。 而在３７ ℃，無論是添加 ＩＰＴＧ 還是沒 有添加 ＩＰＴＧ，都不能檢測(cè)到培養(yǎng)基中 ＣｐｃＢ 的熒光。 較 高溫度下過表達(dá)的蛋白質(zhì)容易形成包涵體并在內(nèi)膜附 近積累，阻斷蛋白質(zhì)的易位通道，減少分泌。 另外，藻 藍(lán)蛋白的色素化也可能受阻。 在 ２５ ℃沒有 ＩＰＴＧ 存在 的情況下，表達(dá)２４ ｈ 后培養(yǎng)基展現(xiàn)明顯 的 ＣｐｃＢ 熒光，并且隨著表達(dá)時(shí)間的增加，熒光強(qiáng)度逐步 升高。 這些結(jié)果表明溫度是影響胞外分泌的關(guān)鍵因素， 而２５ ℃是促進(jìn)藻藍(lán)蛋白胞外分泌的較好溫度，這與先 前研究的其他蛋白胞外分泌最佳溫度一致 ，表達(dá)溫度 應(yīng)該保持細(xì)胞生長(zhǎng)和蛋白合成的平衡以促使胞外分泌。

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