依據(jù)JJF1815-2020《Ⅱ級(jí)生物安全柜校準(zhǔn)規(guī) 范》，人員、產(chǎn)品和交叉污染保護(hù)測(cè)試采用微生物 法或碘化鉀法，仲裁時(shí)用微生物法。人員、產(chǎn)品和 交叉污染保護(hù)項(xiàng)目，此三個(gè)校準(zhǔn)項(xiàng)目的操作方式相 似，其中人員保護(hù)項(xiàng)目是生物安全柜的校準(zhǔn)中難度 較大的項(xiàng)目，操作較為繁瑣復(fù)雜。下面以其中最受 關(guān)注的人員保護(hù)項(xiàng)目為例進(jìn)行測(cè)試方法說(shuō)明。

1.  人員保護(hù)的微生物法測(cè)試 微生物法是將已經(jīng)配制完成的不同濃度枯草 芽孢桿菌菌液以噴霧器主動(dòng)釋放，由碰撞采樣器和 狹縫采樣器進(jìn)行收集，磷酸鹽緩沖液和營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿充當(dāng)載體的方式，對(duì)安全柜人員、產(chǎn)品和交叉 污染保護(hù)進(jìn)行檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法。作為JJF1815-2020 《Ⅱ級(jí)生物安全柜校準(zhǔn)規(guī)范》的仲裁檢驗(yàn)方法以及 NSF49中唯一承認(rèn)的檢驗(yàn)方法，微生物法科學(xué)、準(zhǔn) 確、有效。 在試驗(yàn)開始前安全柜啟動(dòng)并運(yùn)行至少30min， 并連續(xù)運(yùn)行至所有測(cè)試完成。將安全柜氣流流速設(shè) 置為標(biāo)稱值，使其處于正常工作狀態(tài)下。

 2. 試驗(yàn)儀器分布設(shè)置 將盛有55mL濃度為5×108CFU/mL～8×108CFU/ mL枯草芽孢桿菌芽孢計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（或粘質(zhì)沙雷 氏菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）菌液的噴霧器置于安全柜內(nèi)，距左 右兩側(cè)壁距離相等，噴霧器噴射軸在工作臺(tái)面上方 360mm處，噴嘴前端距前窗操口內(nèi)側(cè)100mm，且正對(duì) 前窗操作口，如圖4所示。 干擾圓筒置于安全柜中央，且中心軸在工作臺(tái) 面上方70mm，圓筒一端緊靠安全柜后壁，另一端 應(yīng)伸出安全柜前窗操作口至少150mm。被檢安全 柜前共放置6個(gè)左右對(duì)稱的撞擊采樣器，分別盛有 20mL的無(wú)菌稀釋液，且采樣口正對(duì)安全柜。其中 圓筒周圍設(shè)4個(gè)撞擊采樣器，它們的采樣口前端距 安全柜63mm。其中，兩個(gè)撞擊采樣器的采樣口軸 線相距150mm，與圓筒上沿平齊；兩個(gè)撞擊采樣器 采樣口軸線相距50mm，位于距圓筒下沿30mm的水 平面上。另兩個(gè)撞擊采樣器的采樣口前端距安全柜 50mm，采樣口軸線相距300mm，采樣口位于工作臺(tái) 面上360mm處的水平面上。 設(shè)置兩個(gè)狹縫采樣器，其采樣平面與安全柜 工作臺(tái)面平齊，采樣口的垂直軸線在安全柜前方 150 m m處，兩個(gè) 狹縫采樣器距離左右側(cè)壁均為 200mm。當(dāng)安全柜標(biāo)稱寬度小于90cm時(shí)，設(shè)置兩個(gè) 狹縫采樣器，其采樣平面與安全柜工作臺(tái)面平齊， 采樣口的垂直軸線在安全柜前方150mm處，兩個(gè)狹 縫采樣器距離左右側(cè)壁均為50mm。設(shè)置兩個(gè)狹縫 采樣器，采樣口位于工作臺(tái)面上360mm處的水平面 上，采樣口的垂直軸線在安全柜前方50mm處，兩個(gè)撞擊采樣器的采樣口軸線相距150mm，如圖2所示。 取一個(gè)作為對(duì)照的培養(yǎng)皿放置在圓筒中心軸下方， 且位于前窗進(jìn)氣格柵上方或下方10mm處，使其對(duì) 進(jìn)氣氣流干擾最小。

3. 試驗(yàn)步驟 試驗(yàn)需重復(fù)進(jìn)行3次，每次30分鐘，試驗(yàn)順序 如表1所示

依據(jù)JJF1815-2020《Ⅱ級(jí)生物安全柜校準(zhǔn)規(guī) 范》，將采集的濾膜在無(wú)菌條件下封入培養(yǎng)皿中，在 37℃下培養(yǎng)24～48h后進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)。由于該方 法需要更高的操作和設(shè)備要求，且需耗時(shí)數(shù)天才能 得到結(jié)果，無(wú)法當(dāng)場(chǎng)驗(yàn)證，因此日常校準(zhǔn)中常采用 碘化鉀法。