1 材料與方法 

1.1 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn) 

于2017年4月在山東省林業(yè)科學(xué)研究院組 培室進(jìn)行。 

1.2 試驗(yàn)材料 

采用山東省林業(yè)科學(xué)研究院自主培育的中國(guó)檉柳莖段為試材。 

1.3 試驗(yàn)方法

將帶回的小枝剪成長(zhǎng) 1.5~2 cm 莖 段，先用肥皂水洗凈表面灰塵和菌體，洗凈后，流水沖 洗0.5~1 h。將清洗后的莖段置于超凈工作臺(tái)上，用75% 酒精浸泡30 s，期間緩慢晃動(dòng)，用無(wú)菌水沖洗3遍，再用 2%次氯酸鈉消毒液浸泡3~5 min，無(wú)菌水沖洗4~5次，倒 入0.1%含有吐溫的升汞溶液中輕晃(3、5、8、10 min)，無(wú) 菌水沖洗5次，取出莖段，用無(wú)菌濾紙吸去表面水分， 剪去接觸升汞的外植體斷面，接種在初代培養(yǎng)基上。 10天后統(tǒng)計(jì)外植體的滅菌及生長(zhǎng)情況。初代培養(yǎng)使用MS培養(yǎng)基，加蔗糖20 g/L， 瓊脂 6.5 g/L，pH 5.8~6.0。培養(yǎng)條件為溫度(25±2)℃， 光照度2000~3000 lx，光照時(shí)間14 h。經(jīng)過(guò)15~20天的 培養(yǎng)，觀察新梢生長(zhǎng)情況。MS 為基本培養(yǎng)基，取初 代培養(yǎng) 30 天、苗高為 1.0~2.0 cm 的無(wú)菌苗，接種于添 加不同配比的 6-BA(0.5、1.0、1.5 mg/L)和 NAA(0.05、 0.1、0.2 mg/L)的培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基均附加蔗糖30 g/L、 瓊脂7.0 g/L，pH 5.8。試驗(yàn)每處理1瓶，每瓶接種6個(gè) 單芽，重復(fù) 3 次。置光下（培養(yǎng)溫度(25±2)℃，光強(qiáng) 2000~3000 lx，光照時(shí)間16 h/d）培養(yǎng)30天后觀察統(tǒng)計(jì) 苗芽增殖情況。生根率=(生根外植體數(shù)/接種外植體數(shù))×100% … (3) 1.3.6 試驗(yàn)儀器 雙人雙面垂直凈化工作臺(tái)（上海博迅 實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn) ，外型尺寸 1460 mm ×700 mm × 1650 mm，工作區(qū)風(fēng)速范圍 0.1~0.6 m/s（可調(diào)））；上海博迅YQX-100G全自動(dòng)立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)， 100 L）。

2 結(jié)果與分析

將經(jīng)升汞處理不同時(shí)間的外植體接種到初代培養(yǎng) 基上，10天后統(tǒng)計(jì)外植體的滅菌及生長(zhǎng)情況如表1所 示。處理1污染率較高，說(shuō)明升汞3 min浸泡滅菌不夠 徹底；當(dāng)升汞浸泡時(shí)間延長(zhǎng)至5 min，污染率顯著降低 至5.6%，外植體長(zhǎng)勢(shì)較好。但隨著升汞浸泡時(shí)間的再 延長(zhǎng)，外植體污染率呈升高態(tài)勢(shì)，部分外植體底部出現(xiàn) 褐化，加入活性炭能夠抑制褐化現(xiàn)象。當(dāng)升汞浸泡時(shí) 間達(dá)到 10 min 時(shí)，部分外植體出現(xiàn)整株干枝情況。綜上，采取75%酒精浸泡30 s、2%次氯酸鈉浸 泡 3~5 min 和升汞浸泡 5 min 的滅菌方案為最適宜的 滅菌方案。

3 討論 

在檉柳的快繁體系建立過(guò)程中，通常采用種子、 莖段等作為外植體獲得無(wú)菌苗，后通過(guò)2種途徑（誘 導(dǎo)愈傷組織進(jìn)而獲得叢生芽和直接誘導(dǎo)叢生芽）進(jìn) 行擴(kuò)繁。本試驗(yàn)采用直接誘導(dǎo)叢生芽的方法進(jìn)行擴(kuò)繁，周期短，操作簡(jiǎn)單，能快速獲得大量無(wú)菌苗。在誘 導(dǎo)叢生芽的過(guò)程中，對(duì)細(xì)胞分裂素 6-BA 和生長(zhǎng)素 NAA 的配比是叢生芽生長(zhǎng)健壯與否的關(guān)鍵，6-BA 有 促進(jìn)細(xì)胞分裂、分化、抑制頂端優(yōu)勢(shì)、促進(jìn)側(cè)芽的作用； NAA主要是促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)，特別是細(xì)胞的伸長(zhǎng)。劉 振林在進(jìn)行白花檉柳的叢生芽誘導(dǎo)過(guò)程中采用的生長(zhǎng) 素為IBA，叢生芽的出芽率達(dá)98.68%。

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